五味子(Schisandra chinensis(Turcz．)Baill)，是五味子科五味子属植物，具有止痛止咳、提高肝功能、收敛滋补等功效。近年来研究发现五味子的一种木脂素成分五味子酯甲体外可抑制人肝微粒体CYP3A4的酶活性。但是，另外一些研究的结果与之相反：灌服五味子水提物可以诱导大鼠肝CYP450总水平增高，并加快丙咪嗪和利多卡因的代谢；五味子提取物及某些成分在人肝细胞培养体系中可诱导CYP3A4的mRNA表达。由于五味子对CYP3A酶活性的抑制或诱导均来自独立的实验研究，因此其原因难以确定，存在以下几种可能：(1)实验误差；(2)五味子在不同实验条件下(浓度、时间、离体/整体、动物种属等)呈现不同性质的作用；(3)五味子中不同活性成分分别产生酶抑制与诱导作用，依实验体系不同观察到性质不同的CYP3A酶活性的变化。课题计划在不同实验体系和条件下系统考察五味子对CYP3A酶活性的影响性质及程度，进而阐明五味子对CYP3A酶活性的不同作用的原因并探讨其可能的临床意义。我们采用大鼠肝微粒体模型和人肝微粒体及肝细胞模型，通过测定CYP3A酶的特异性底物睾酮代谢成6β羟基睾酮的速率来反映CYP3A酶活性，分别在离体和整体条件下研究五味子提取物对大鼠肝CYP3A酶和人肝CYP3A4酶活性的影响，并通过药效学实验观察CYP3A酶活性改变对其他药物效应的影响。此外我们还对八种五味子科木脂素组分和两种木脂素衍生化合物对CYP3A4酶活性的影响进行了研究以期寻找构效关系的线索。 第一部分五味子对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的影响 目的：研究离体条件下五味子、五味子科木脂素成分和五味子衍生药物联苯双酯、双环醇对大鼠肝CYP3A酶活性的影响；研究五味子水提物体内给药对大鼠肝CYP3A酶活性的影响。 方法：(1)建立大鼠肝微粒体孵育体系，处理组加入30～1500mg·mL<-1>的五味子水提物，对照组仅加入tris缓冲液，孵育15min后再加入特异性底物睾酮孵育20min，甲醇终止反应，用高效液相色谱仪检测代谢产物6 B羟基睾酮的生成速率反映CYP3A的酶活性变化。同法测定五味子醇提物、五味子科八种木脂素成分和联苯双酯、双环醇对大鼠用FCYP3A活性的影响。(2)大鼠灌胃给予不同剂量的五味子水提物(1g/kg和3g/kg)，每日一次，分别于首次给药后12h、3d和6d，取肝组织制备肝微粒体，同前述方法测定五味子水提物整体给药时CYP3A酶活性的影响。 结果：离体给药时，五味子水提物和醇提物对大鼠CYP3A酶活性呈浓度依赖性抑制作用，半数抑制浓度IC<,50>分别为487.8和175.7 mg/L，五味子酯甲、南五味子素、异南五味子素、内南五味子素、angeloyl binankadsurina A和双环醇的IC<,50>分别为3.77、6.18、20.67、16.43、23.07和12.46μM。整体给药五味子水提物对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的影响呈现抑制和诱导双重作用，即给药后12h为酶抑制，3d后由抑制转为诱导趋势，6d后呈现诱导作用。 结论：五味子水/醇提取物、五味子酯甲、南五味子素、异南五味子素、内南五味子素、angeloylbinankadsurina A和双环醇对大鼠肝CYP3A活性有浓度依赖性抑制作用。五味子水提物整体给药对大鼠CYP3A酶活性表现为抑制和诱导双重作用。 第二部分五味子水提物整体给药对氯吡格雷抗大鼠血小板聚集作用的影响 目的：通过药效学考察五味子水提物整体给药对CYP3A酶活性的双重作用评价五味子引起药物相互作用的可能性。 方法：大鼠灌胃给予五味子水提物(3g/kg)，每日一次，分别予首次给药12h和6d后单次灌胃给予氯吡格雷(2mg/kg)，两小时后从腹主动脉采血观察ADP 诱导的血小板聚集率的变化。 结果：单用氯吡格雷对ADP诱导的血小板聚集抑制率为61.9±9.8％，灌服五味子水提物(3g/kg) 12h后氯吡格雷作用减弱，抑制率降低为40.0±14.2％，灌服五味子水提物6d后氯吡格雷作用增强，抑制率增高到80.9±8.3％。 结论：大鼠灌胃给予五味子水提物早期(12h)可抑制CYP3A酶活性，从而抑制氯吡格雷的抗血小板活性；反复多次给药(6d)后，五味子水提物可诱导CYP3A酶活性，从而增强氯吡格雷的抗血小板活性。 第三部分五味子对人肝细胞色素P450同功酶的影响 目的：研究五味子水提物及木脂素成分对离体人肝CYP3A4酶活性的影响，并考察五味子对CYP1A2、CYP2A6、CYP2D6酶活性的影响。 方法：(1)采用健康成人肝微粒体，处理组加入30～1500mg·mL<-1>的五味子水提物，孵育15 min后再分别加入CYP1A2、2A6、2D6和3A4相应底物(非那西丁、香豆素、右美沙芬和睾酮)，孵育30 min。反应终止后用HPLC测量代谢产物(对乙酰氨基酚、7-羟基香豆素、0-脱甲基右美沙芬和6β-羟基睾酮)的生成速率，计算CYP1A2、CYP2A6、CYP2D6和CYP3A4的活性。同法观察八种五味子科木脂素成分(终浓度为100μM)、五味子衍生物联苯双酯和双环醇对人肝微粒体CYP3A4酶活性的影响。(2)采用健康人原代肝细胞培养体系，处理组加入1500 mg·mL<-1>的五味子水提物，对照组仅加入培养液，阳性对照组加入利福平(50pM)，共同培养3d后加入CYP3A4底物睾酮孵育60 min，反应终止后同上法测定酶活性。 结果：(1)五味子水提物对CYP2A6、CYP2D6、CYP1A2、CYP3A4同功酶具有浓度依赖性抑制作用(IC<,50>分别为382.8、456.7、370.0和317.3mg/L)；八种五味子木脂素成分对CYP3A4活性的抑制活性有明显差异，其中异南五味子丁素、内南五味子素、南五味子素、五味子酯甲和angeloylbinatlkadstrin A抑制活性较强在100μM浓度时可使CYP3A4的酶活性降低到5％以下。联苯双酯和双环醇可浓度依赖性的抑制人CYP3A4酶活性，IC<,50>分别为10.0μM和28.8μM。(2)人原代肝细胞培养中，五味子水提物在1500mg/L浓度时可以使CYP3A4酶活性降低50％以上的，未见酶诱导现象。 结论：五味子水提物对CYP1A2、CYP2A6、CYP2D6均能产生一定的抑制作用，但对CYP3A4抑制作用更强。联苯双酯和双环醇可浓度依赖性的抑制CYP3A4酶活性。新发现了五味子木脂素成分中异南五味子丁素、内南五味子素、南五味子素和angeloyl binankadsurin A为CYP3A4的有效抑制剂。