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欧洲七叶树是重要的园林绿化树种,并具有重要的医药价值,国内引种栽培有限,种苗供不应求,通过细胞工程技术快速繁殖性状优良的再生植株,具有重要的应用价值和理论意义。本文就欧洲七叶树的组织培养和体细胞胚发生以及植株再生进行了系统研究,主要结果如下: 以植物细胞具有全能性的理论为依据,以欧洲七叶树幼嫩叶片为外植体,进行体细胞胚胎发生研究,研究结果表明,诱导愈伤组织的适宜培养基是MS+2,4-D 2mg/L+KT0.2mg/L,MS+BA 8mg/L+NAA 1mg/L有利于胚性愈伤组织的诱导和增殖,添加ZT 2mg/L或BA 5mg/L和IAA 0.2mg/L的MS培养基有利于体细胞胚发育和成熟,体细胞胚可直接诱导次生胚发生,MS+KT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L或MS+ZT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L培养基诱导效果最好,增殖频率分别为214%、256%。 以欧洲七叶树体细胞胚的子叶为外植体,诱导次生胚发生或分化不定芽。结果表明,MS+ZT 0.5~2mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.2mg/L培养基可直接诱导体胚发生,诱导率超过80%;MS+BA 2mg/L+NAA 0.2 mg/L或MS+TDZ 0.01 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基可直接分化不定芽,出芽诱导率分别为88%、100%。 以欧洲七叶树成熟种子的胚芽进行离体培养和快速繁殖,结果表明:高约2cm的无菌苗在MS+0.6mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA或MS+0.4~0.6mg/L ZT+0.1 mg/L NAA培养基上培养15 d左右可诱导出不定芽,分化频率为100%,平均每株产芽35.7个;MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+10mg/L AD培养基有利于芽伸长;生根培养基为1/2MS+0.4 mg/L NAA+0.2mg/L IBA时,生根率可达75%。 通过组织细胞学方法研究体细胞胚的起源与发生部位,发现欧洲七叶树体细胞胚为单细胞起源,外植体的表面及内部都可以发生体细胞胚。胚性细胞多为椭圆形,细胞质浓厚,核仁明显,代谢旺盛;体细胞胚经过球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶胚而发育成再生植株,子叶期体细胞胚可观察到明显的V型维管束、茎尖分生组织以及根尖分生组织。 综合上述研究结果,为大规模生产欧洲七叶树,以完整的体细胞胚诱导次生胚效果最好,合适的培养基为MS+KT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L或MS+ZT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L。