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本文主要建立食品中苏丹红Ⅰ的系列免疫学检测方法,通过对反应条件的优化,建立了酶联免疫吸附分析法,化学发光酶联免疫分析法,吖啶酯标记化学发光法以及免疫亲和柱-高效液相色谱法。1.建立酶联免疫吸附分析法检测苏丹红Ⅰ分别对人工抗原的半抗原Sudan I与载体蛋白BSA的偶联摩尔比例、抗原抗体浓度、反应缓冲液的离子浓度、pH值等条件参数进行优化,研究对ELISA反应的OD450值和竞争反应的IC50值的影响。确定人工抗原的偶联比例Sudan I:BSA为2.05：1,反应缓冲液PBS中NaCl的浓度为0.0675mol/L,反应缓冲PBS的pH值为7.4。根据优化条件建立的间接竞争抑制曲线,IC50为1.6ng/mL,线性范围是0.42ng/mL～10ng/mL,最低检测限是0.264ng/mL。加标回收率为94.59～150.18%,变异系数为5.3～10.9%。2.建立化学发光酶免疫分析法检测苏丹红Ⅰ分别研究人工抗原的半抗原Sudan Ⅰ与载体蛋白BSA的偶联摩尔比例、抗原抗体浓度、反应缓冲液的离子浓度、pH值对化学发光强度RLU、竞争反应IC50值的影响,以RLU/IC50最大为优化条件。人工抗原的偶联摩尔比例为Sudan I:BSA为11.8：1,反应缓冲液PBS中NaCl的浓度为0.0675mol/L,反应缓冲PBS的pH值为6.4。根据优化条件建立的间接竞争抑制曲线,IC50为0.679ng/mL,线性范围是0.132ng/mL-5ng/mL,最低检测限是0.0789ng/mL.加标回收率为75.08～112.18%,变异系数为8.89～15.61%。3.建立吖啶酯标记抗Sudan Ⅰ单克隆抗体化学发光分析法首先对几种单克隆抗体的纯化方法进行了比较研究,结果是Protein A柱和苏丹红Ⅰ抗原免疫亲和柱的纯化效果较好。通过对H2O2、HNO3、NaOH、表面活性剂TritonX-100的浓度进行两次正交试验,得到吖啶酯化学发光启动剂配方A液：0.3%H2O2,0.05mol/LHNO3; B液:0.5mol/LNaOH,3% TritonX-100。然后利用吖啶酯-NHS标记纯化的苏丹红Ⅰ单克隆抗体,优化得到偶联比在10：1时发光强度较大,能较好保持抗体活性。建立的竞争抑制曲线的线性范围为0.436ng/mL～10 ng/mL, IC50为 1.5ng/mL,检测限为0.26ng/mL。加标回收率为80.15～115.04%,变异系数是3.59-11.36%。4.建立免疫亲和柱-高效液相色谱法采用免疫亲和柱对样品加标提取液进行净化处理,高效液相色谱条件为色谱柱：C18反相色谱柱(ODS Hypersil,2.1mm×100mm,5μm)。流动相：溶剂A：溶剂B=25：75(V：V),(溶剂A： 0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85：15,溶剂B：0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20)流速：1mL/min。测得苏丹红Ⅰ免疫亲和柱的柱容量为800-900ng。建立的方法,在25-4000ng/mL浓度范围内具有较好线性关系,检测限为1.5ng/mL,定量限为25ng/mL。加标回收率在68.53～92.35%之间,变异系数1.34～7.8%。建立的四种免疫学检测方法具有较高的灵敏度与特异性,能用于实际样品辣椒粉中的苏丹红Ⅰ检测。