大部分传统的寄生虫疫苗不能阻止寄生虫感染，这主要是由于寄生虫具有免疫逃避能力、生活史复杂、未找到合适抗原、以及免疫机制未阐明等原因造成的。新出现的DNA疫苗再次燃起了人们对疫苗抗寄生虫感染的希望。在过去的十年中，DNA疫苗至少在多种抗寄生虫感染中获得了部分成功。抗丝虫感染的核酸疫苗也得到了研究，目前正在寻找有效抗原。资料表明，pmy、cys、myosin作为抗原均可诱导实验动物产生保护性免疫应答。本研究中，根据Genbank上提供马来丝虫的pmy及其部分片段、cys-p、myosin序列，自行设计合成引物，采用RT-PCR技术，扩增从感染动物模型沙鼠体内提取的马来丝虫的pmy及pmy-N端,cys,myosin基因片段，扩增长度分别为2640bp、792p、120lbp、1384bp。电泳鉴定后纯化PCR扩增产物，与T载体(pGEM-T，pMDl8-T)连接，重组质粒转化大肠杆菌DH5a,蓝白斑法筛选阳性克隆经PCR和酶切初步鉴定后，送基因公司测序，测序结果经过分析，与Genebank上提供的相应序列比较，其结果同源性分别为99％、98％、98％、99％，从而克隆了目的基因片段。根据pmy测序结果，推测其氨基酸序列，然后利用相关软件预测它的B细胞表位。 在设计引物时，引物中已引入限制性酶切位点，因此，酶切阳性重组质粒和真核表达质粒，纯化酶切片段后，用T4连接酶连接酶切片段，转化感受态大肠杆菌，筛选阳性克隆，经PCR和酶切鉴定，获得阳性重组质粒，真核载体构建成功。大量提取重组表达质粒pcDNA3.1(+).pmy,经过无菌处理后，采用磷酸钙-DNA共沉淀法转染cos-7细胞。初步筛选阳性细胞克隆，进行RT-PCR验证。 结果和结论： 从马来丝虫中高质量的提取了总RNA,用RT-PCR法特异扩增出多基因片段；构建了克隆载体并进行序列测定与分析；预测了pmy的B细胞表位；成功构建了真核表达载体；转染重组表达质粒至cos-7细胞，并进行了初步验证。