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研究背景缺血性脑血管病严重危害人类的健康,已经成为医学界研究的难题,给全世界带来了困扰。缺血再灌注是使缺血的组织器官重新得到血液灌注,恢复器官的功能,修复损伤的组织。促进缺血中心及其周围组织血管新生,恢复其血液循环,是目前治疗脑缺血新方法。缺血再灌注后炎症因子对血管新生表现出较大的特殊性,如肿瘤坏死因子-a (TNF-α)可表现出促进或者抑制的双重角色作用,如何减少其对脑缺血组织损伤,增强神经元保护和修复作用是目前急需解决的研究难题。研究目的研究]TNF-α对脑缺血再灌血管新生作用。研究方法(1)分离纯化SD大鼠脑微血管内皮细胞(Rat cerebral microvascular endothelail cells RCMECS)、CD31免疫荧光鉴定细胞。(2)纯化的RCMECS在正常情况下应用MTT法测]TNF-α对其活力影响。(3)缺氧4h／复氧72h,ELISA检测外源性和自分泌TNF-α对RCMECS上清VEGF、MMP-2表达影响。(4)第3代RCMEC于缺氧小室内培养4h后复氧,qRT-PCR测定细胞VEGF、MMP-2mRNA表达,并和其他组进行比较。(5)建立MCAO再灌注模型,观察TNF-α对缺血皮质区血管新生的作用。结果(1)获得纯度为90%RCMECS,符合实验要求。(2)0.1ng/ml TNF-α加药后24h降低RCMECS活力(P<0.05)。(3)复氧72h后,自分泌的TNF-α对细胞上清中的VEGF、MMP-2表达没有影响,而外源性TNF-α给药组明显高于模型组(P<0.05)。(4)复氧48h后VEGF、MMP-2mRNA表达量TNF-α组分别是模型组1.7、1.9倍。(5)成功建立MCAO再灌注模型。(6)缺血再灌注后7d、14d、21d TNF-α组皮质区血管新生数量均高于PBS组。结论TNF-α刺激体外和体内模型分泌VEGF、MMP-2增多,促进大鼠MCAO再灌注模型皮质区血管新生。