目的:宫颈癌是女性死亡首位疾病。临床对晚期宫颈癌治疗效果差是造成死亡数量居高不下的原因,而现有三大治疗手段对晚期病人治疗有限。目前研究证实在大部分宫颈癌病人中是由HPV对机体内源性因素产生影响,进一步引起细胞增殖和凋亡的调节异常,导致宫颈组织癌变。而通过诱导凋亡治疗肿瘤己成为当今的焦点,研究其作用机制是不可缺少的。研究表明各种刺激诱导细胞凋亡的同时出现细胞内酸化,阐明两者的关系无论对于细胞生长机制或是对于用药物干预细胞内pH值进而影响细胞凋亡都具有重要意义。细胞内的酸化是凋亡的重要特征,它与细胞凋亡同时存在,并可影响很多与凋亡相关的重要基因的表达和酶的活性。所以推测在细胞凋亡中可能存在这样一种模式:由细胞编程或外界理化刺激引起基因间相互作用及细胞内信号系统的改变→影响细胞内pH改变→细胞凋亡相关酶和蛋白活性改变→细胞凋亡。因此,细胞内酸化可能是作为许多因素诱导细胞凋亡作用的汇集。Na~+/H~+交换器(NHE1-6)是一种离子交换蛋白,其中NHE-1被认为是一种“看家基因”几乎在所有哺乳动物细胞的细胞膜均有分布,在调节细胞内PH(Phi)、细胞体积、细胞增殖等方面起重要作用。正常生理情况下NHE-1.处于非活化状态,当细胞受到血清、生长因子等作用时NHE-1被激活在细胞增殖的早期阶段即出现NHE-1交换增强致使细胞内碱化,导致细胞增殖。质膜Na~+/H~+交换系统能依赖胞外较高浓度的Na~+,驱动胞内H~+的外排,这一过程能被利尿剂Amiloride(阿米洛利)及其类似物EIPA(乙基,异丙基氨氯吡咪)等抑制。有研究表明,通过抑制Na~+/H~+交换导致pHi低于某一阈值时,可以引起HL-60细胞凋亡。目前宫颈癌细胞凋亡与细胞内PH值变化相关的研究国内外报道很少。本实验旨在从细胞酸化角度来探索宫颈癌细胞凋亡的情况,为临床治疗宫颈癌提供新思路,有深远的理论意义和实用价值。 方法:(1)使用不同浓度的Na~+/H~+交换器的特异性抑制剂EIPA诱导Hela细胞酸化;(2)使用苏木精-尹红复染法,在光学显微镜观察药物作用不同时间后细胞的形态变化;(3)使用琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞DNA