脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、ABCG1、LXRα及胆固醇含量的影响及机制

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目的本实验通过构建RAW264.7源性泡沫细胞模型,探讨脂联素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、LXRα的表达以及胆固醇含量的影响,进一步阐述其可能的机制。方法体外培养RAW264.7细胞,加入终浓度为20mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育48h,将其诱导成泡沫细胞。实验分为4组:①空白对照组;②1μg/ml脂联素组;③5μg/ml脂联素组;④10μg/ml脂联素组;分别干预6h、12h、24h后,实时荧光定量Real-Time PCR法测定各组细胞ABCA1、ABCG1、LXRαmRNA的相对表达量,Western Blot测定各组细胞蛋白含量,高效液相色谱测定细胞内胆固醇含量。观察脂联素对泡沫细胞中ABCA1、ABCG1、LXRα的影响。结果1.倒置显微镜下观察:48h后RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞间形成细胞连接,成簇生长,经油红O染色可见细胞内有红色脂滴,即为泡沫细胞;2.RT PCR和Western Blot印记分析的结果显示:各组均可检测到ABCA1、ABCG1、LXRαmRNA和蛋白的表达:与空白对照组相比,相同时间下,10μg/ml脂联素组比5μg/ml脂联素组各指标的mRNA相对表达量及蛋白表达增加,细胞内胆固醇含量减少(P<0.05),5μg/ml脂联素组比1μg/ml脂联素组各指标的mRNA的相对表达量及蛋白表达增加,细胞内胆固醇含量减少(P<0.05);3.与正常对照组相比,相同浓度下,24h组比12h组细胞各指标的mRNA的相对表达量及蛋白表达显著增加,细胞内胆固醇含量显著减少(P<0.05),12h组比6h组细胞各指标的mRNA的相对表达量及蛋白表达显著增加,细胞内胆固醇含量显著减少(P<0.05)。结论1.脂联素可以增加巨噬源性泡沫细胞ABCA1、ABCG1、LXRα转录和翻译水平,减少细胞内胆固醇含量,促进胆固醇流出,逆转泡沫细胞的形成,延缓AS的发生发展。2.脂联素增加ABCA1、ABCG1、LXRα转录和翻译水平,减少细胞内胆固醇含量呈时间依赖性和浓度依赖性。
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