绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达与应用

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuyr821
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文围绕绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达及应用,从以下几个方面进行了研究,取得结果如下: 1.绿色荧光蛋白基因gfp在苏云金芽胞杆菌中表达的初探 将携带蜡状芽胞杆菌特异启动子的gfpmut3α基因克隆到穿梭载体pHT304后,电转化至苏云金芽胞杆菌BMB171,CryB,IPS78-11,4Q7,HD-80-21中。通过荧光显微镜和Bio-assay Reader对含重组质粒pGFP-304的5个受体菌分别进行荧光检测及定量分析。结果表明,gfpmut3α基因仅在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,CryB,IPS78-11,4Q7中表达并可检测得到菌体发光,并建立了一套适合于苏云金芽胞杆菌的gfp标记与检测方法。 2.利用绿色荧光蛋白基因gfp研究芽胞杆菌的启动子活性 绿色荧光蛋白基因gfp分别标记苏云金芽胞杆菌的cry3A启动子Pcry3A,BtⅠ-BtⅡ启动子PBtⅠ-BtⅡ和来自蜡状芽胞杆菌特异启动子P44-12以研究其表达差异。其中,Pcry3A和PBtⅠ-BtⅡ分别与gfp构成融合基因,以调控gfp在苏云金芽胞杆菌中的表达。将重组质粒pGFP-304(含P44-12)、pGFPExpA(含Pcry3A-gfp融合基因)和pGFPExpB(含PBtⅠ-BtⅡ-gfp融合基因)分别导入大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌后发现,P44-12和PBtⅠ-BtⅡ在大肠杆菌与苏云金芽胞杆菌中均可表达gfp,其中PBtⅠ-BtⅡ在大肠杆菌中具有极强的启动基因表达的能力。而Pcry3A不能启动gfp在大肠杆菌中表达,在苏云金芽胞杆菌中启动的gfp表达的荧光强度也较弱。 3.携带不同启动子苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的微量热学变化 生物活性检测器对含重组质粒pGFP-304,pGFPExpA和pGFPExpB的转化子分别进行荧光检测及微量热检测。结果表明,3种启动子驱动下的gfp基因均可在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171中表达并检测得到不同的发光类型。微量热法检测发现P44-12和P(BtⅠ-BtⅡ)启动gfp表达的代谢热低于Pcry3A驱动gfp表达的代谢热。 4.苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的构建 本研究利用SOE法将构建的绿色荧光蛋白基因gfp和苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac10的嵌合基因克隆到穿梭载体pAD4412上获得成重组质粒pBMBZGC10。同时又将苏云金芽胞杆菌启动子PBtⅠ-BtⅡ替换蜡状芽胞杆菌启动子P4412,经同一穿梭载体pAD4412构建得到了pBMBZGC11。再通过电转化法将它们导入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株BMB171和cryB中获得重组菌株BMB171(PBMBZGC10);CryB(pBMBZGC10);BMB171(PBMBZGCll)和CryB(P BMBzGcll)。经荧光显微镜观察标记重组菌株仅能在标记重组菌株BMB171(pBMBzoelO)和CryB(pBMBZGClo)中检测到嵌合基因的表达;SDS一PAGE结果也显示了融合蛋白约为1 50 kDa大小的蛋白带型。5.苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的荧光检测分析 本研究分别利用Leiea Stereo MZFlll型荧光显微镜、Leiea Di叩lan型荧光显微镜和Zeiss Axioplan型激光共聚焦扫描显微镜,对苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的菌落、菌液、菌体分别进行荧光检测。ZeisS荧光显微镜激发光波长为488nm、发射光波长为522nm(oF32)。并用Laser sharp Z000TM专用软件对收集到的图形信号进行捕获和处理。近一步用Bio一assay Reader对标记重组菌株进行荧光强度的检测,选择激发滤光片为485二、发射滤光片为52Onm。用HT Soft 2.0软件分析所得数据。6.帮助蛋白P20对苏云金芽胞杆菌标一记重组菌株影响的研究 将携带有pZ口基因的穿梭载体pBMBZO一2,利用电转化的方法分别导入苏云金芽胞杆菌标记重组菌株BMB 1 71(pBMBZGClo)和CryB(pBMBZGClo)得到BMB 1 71(pBMBZGC 10一20)和CryB(pBMBZGC 10一20)。经普通光学显微镜和荧光显微镜观察尸2口基因对融合基因表达的影响。结果发现重组菌株BMB 171(pBMBZGC 10一20)和CryB(pBMBZGCIO一20)能够检测到很强的绿色荧光。进一步通过荧光强度分析表明,20 kDa帮助蛋白能够增加融合蛋白的表达量。7.苏云金芽胞杆菌标一记重组菌株与杀虫基因水平转移的研究 将重组菌株CryB(pBMBZGC 10)的发酵液按浓度梯度分次进行喷洒小白菜(Brassica夕exinesis)、雍菜(IP000ea啊uatiea)和番茄(勿c叩ersicon esculentum)作为供试植株,利用标一记基因研究的结果表明:cry了Aojo基因没有向供试土壤细菌、真菌和放线菌转移,也未在植物的供试植物根、茎和叶中检测到该基因。
其他文献
<正> (利用多媒体进行辅助教学。在进行了三角形按角分类的教学后,屏幕上出示下图中的五个三角形。先利用这五个三角形进行按角分类的练习,然后将这五个三角形变成五面三角形
会计电算化是一项系统工程,在发展过程中有许多问题必须及时解决,否则将严重阻碍我国会计电算化向更深层次发展.企业管理人员应充分认识会计电算化的重要意义,认真做好管理基
下肢深静脉血栓形成(DVT)是血管外科常见疾病。血管内膜损伤、血流速度缓慢、血液高凝状态是引起DVT的三大主要病因。DVT形成后轻者可导致下肢静脉血栓形成后遗症,影响患者的
糖作为信号分子可以与植物激素(如乙烯、ABA、细胞分裂素)相互作用。近年来,在拟南芥糖信号突变体的遗传学和分子生物学研究中发现了糖和植物激素信号传导途径之间存在复杂的
掌握新媒体的传播特征,借势而为提升自身的"传播力",成为许多文化产品与时俱进的选择。本文结合故宫淘宝微博的文化产品传播策略,探析新媒体时代文化产品传播的策略,以期给其
GPS在邮政运输中的应用邮电部邮政科学研究规划院程伟中张磊邮政运输是邮政生产的重要手段。以往在邮运生产指挥调度上采用开放式管理方式,对于邮政车辆的管理主要是依靠车辆驾驶
"君臣佐使"是中医组方原则的概括,是中医辨证立法的具体体现。闻庆汉教授在小儿推拿临床中灵活运用"君臣佐使"思想,取得了较好的临床疗效。
<正>1概述2016~2017年,我国羊业市场持续回暖,特别是2017年以来市场快速拉升,养殖企业(户)发展趋稳向好,在经历产业发展的调整和转型期后,产业发展进入到新的阶段,企业发展也
会议
从钢筋混凝土增大截面加固法和拱上减载法入手,论证了拱背加固减载法对小跨径实腹式石拱桥进行加固的可行性,并结合依托工程验证了拱背加固减载法在小跨径石拱桥上的应用,并
本文提出基于Android的智能点餐系统设计方案:由Eclipse开发工具构建该智能点餐系统的开发环境,以Java语言进行整个程序的开发,并采用My SQL技术进行数据库构建,选择轻量级To