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近年来,纳米材料对水生生物的生态毒理效应引起了广泛关注,但金属纳米颗粒对双壳贝类免疫系统的影响及其清除机理尚不明确。本文研究了牡蛎在不同纳米氧化镍(Nano-nickel oxide,nNiO)暴露浓度下(0、1、10、100mg/L)的免疫响应,及牡蛎在不同浓度nNiO处理组(0、0.1、1、10、50、100 mg/L)中暴露不同时间后(3、12、24、48、96 h)的清除机理。揭示了牡蛎响应金属纳米氧化物胁迫的分子机制,为研究金属纳米氧化物对双壳贝类的影响提供了数据支撑。结果如下:1、通过nNiO暴露(0、1、10、100mg/L)后美洲牡蛎(Crassostrea viginica)鳃和消化腺的转录组测序分析(RNA-seq),富集了1541个免疫相关基因和17条免疫通路。在1 mg/L nNiO处理组中富集到的免疫通路最多,主要为Toll and Imd信号通路、NOD样信号通路、血小板激活通路、白细胞跨内皮迁移、趋化因子信号通路等;在10 mg/L处理组中富集到的差异基因数量最多,鳃中差异基因51个,消化腺中差异基因42个,鳃中差异基因多于消化腺。2、在富集到的免疫通路中,模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs)介导的免疫识别通路的差异基因最多(70个),其中上调基因44个,下调基因26个。其中Toll and Imd信号通路中的差异基因数最多,为36个。3、Toll and Imd信号通路中的TLR(Toll-like receptor)通路可通过My D88依赖型通路中的细菌识别配体对nNiO进行识别,产生干扰素等免疫效应因子来抵御nNiO的胁迫。4、P-gp和MRP是牡蛎MXR系统中的重要蛋白,可将胞内的nNiO转运至胞外。P-gp和MRP蛋白的转运活性均对nNiO的暴露呈现剂量和时间依赖关系。鳃是牡蛎主要的清除器官,鳃中转运活性是消化腺的3.61倍;P-gp是主要的清除蛋白,加入P-gp的特异性抑制剂后,MXR系统的转运活性降至39.31%。综上所述,nNiO暴露激活了牡蛎的免疫系统,主要通过鳃中My D88依赖型通路的响应对纳米颗粒进行识别,产生干扰素等免疫效应因子来响应nNiO胁迫,利用P-gp等膜上的转运蛋白将纳米颗粒清除。该结果对双壳贝类纳米毒理学的免疫毒性机制研究提供了一定参考。