多穗柯来源于壳斗科石柯属Lithocarpus polystachyus(Wall.)Rehd.,是一种兼具药、茶、糖三种功能的药食两用植物,民间常取其嫩叶泡茶,茶色金黄鲜艳,味道甜中略有苦涩,回味持久,古人常用于清暑解渴[1]。多穗柯叶中含有高达10%的高甜度、低热量的非糖甜味剂,其甜味成分主要为二氢查尔酮类根皮苷、3-羟基根皮苷、三叶苷等[2-6]。现代药理研究表明多穗柯具有降血糖、降血脂、降血压、抗氧化、抗炎、抑菌及抗过敏等多种作用[7-16]。文献研究多表明多穗柯叶的有效成分主要为黄酮类成分。因此本课题针对多穗柯叶有效部位的高效液相指纹图谱和高纯度总黄酮的制备工艺进行研究。目的:本文以多穗柯总黄酮含量,根皮苷含量及3-羟基根皮苷含量为指标,结合多穗柯叶有效部位的高效液相指纹图谱,对不同采收期、不同加工方法、不同栽培方法的多穗柯叶进行考察,最终确定多穗柯叶的最佳采收期、加工方法和栽培方法;同时利用聚酰胺与AB-8大孔树脂联用技术制备高纯度的多穗柯总黄酮,为多穗柯药材的制剂提供科学依据。方法:1.针对影响指纹图谱的色谱条件进行考察,分别考察了流动相及其梯度、不同色谱柱的分离效果、柱温、流速、检测波长和采集时间;然后确定指纹图谱的最佳色谱条件,并进行方法学考察;最后测定10批不同多穗柯叶在最佳色谱条件下的色谱图,以根皮苷为参照峰,确定共有峰,建立多穗柯叶有效部位的高效液相指纹图谱。2.以总黄酮含量为其中一个指标,采用紫外分光光度法进行测定。以3-羟基根皮苷和根皮苷含量为指标,采用高效液相色谱法,以Kromasil(C18 250mm*4.6mm,5 um)为色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,检测波长为285nm,柱温为室温,流速为0.8 mL·min-1。比较不同采收期、不同加工方法以及野生和栽培不同栽培方法多穗柯叶的质量。3.高纯度总黄酮的制备工艺研究:考察了聚酰胺洗脱液浓度、聚酰胺-大孔树脂联用洗脱液浓度、上样量与聚酰胺的比例、上样量与大孔树脂的比例、洗脱液用量等因素对总黄酮纯度的影响,确定最佳的精制工艺并进行工艺验证。结果:1.建立了多穗柯叶有效部位的高效液相指纹图谱,其色谱条件为:C18反相色谱柱Kromasil(C18 250mm*4.6mm,5 μm);甲醇-0.1%甲酸系统梯度洗脱;柱温为 25℃;流速为0.8mL·min-1;检测波长为254nm;进样体积为25 μ L;采集时间为140min。2.不同采收期以及不同栽培方法多穗柯叶中3-OH根皮苷和根皮苷含量以及指纹图谱色谱峰有明显的变化。多穗柯叶中有多种成分,其药理作用不尽一致,以实验所选指标含量高低来判断采收期,则选择总黄酮、3-OH根皮苷及根皮苷含量均较高,而且HPLC特征图谱中总峰面积达到峰值的10月进行采摘。移栽的多穗柯叶中各指标成分含量均高于野生的。而阴干和晒干对多穗柯化学成分及含量影响不大。3.建立了多穗柯高纯度总黄酮的制备工艺,其工艺条件为:洗脱剂为60%的乙醇,上样量(g)与聚酰胺的质量(g)比值为0.075:1～0.09:1,上样量(g)与大孔树脂的质量(g)比值为1:90,洗脱液体积为5BV,总黄酮纯度在90%以上。结论:1.建立的多穗柯叶有效部位指纹图谱,提示了其有效部位的物质基础,同时方法学考察表明该指纹图谱的稳定性好,易于重现。2.采取多指标成分含量测定与指纹图谱相结合的体系评价多穗柯叶质量,同时体现了多穗柯叶有效部位成分的整体特征和个体特征,为更好的控制药材质量提供新思路。3.采用树脂联用制备高纯度总黄酮,方法简单、实用,为后期制剂提供参考。