冬虫夏草是一味来源独特、疗效显著的名贵中药,在我国具有悠久的药用历史,具有“补肾益肺、止血化痰”的功效,主要用于治疗久咳虚喘、阳痿遗精、劳嗽咯血、腰膝酸软等肺肾疾病。自18世纪（1785年）,英国真菌学家Dickson首次将其带回西方,冬虫夏草这味神奇的中药从此走出国门,走向世界,也打开了冬虫夏草现代研究的大门。现代药学研究证明,冬虫夏草富含多种化学成分,其补益作用主要表现在对机体免疫调节方面有着独特疗效。随着人们对亚健康越来越重视,冬虫夏草这味性味温和的天然补益药市场需求日益增大,而其年产量有限,人工培育等替代品研究尚不成熟。其价格昂贵,逐年升高,市场出现了大量的掺伪品、混淆品,并且流通渠道较为混乱、不规范。而《中国药典》对冬虫夏草品种定义存在值得商榷的地方,对其质量控制标准仅以在虫生真菌内广泛存在的腺苷作为指标性成分,难以有效地、有针对性的鉴别真伪并进行质量评价。蛋白类成分是冬虫夏草化学成分的重要组成部分,蛋白质本身就是品种遗传信启、在细胞水平的表达,并且通常具有良好的生物活性,蛋白组学是目前国内外研究热点,特别是其在差异性蛋白表达、功能性蛋白筛选方面具有独特的优势,而一直以来对冬虫夏草蛋白成分的研究较为滞后,相关报道极少。鉴于此,本课题对冬虫夏草开展了以下几方面的研究工作：1、正品冬虫夏草品种研究通过对冬虫夏草菌体、虫体的基原品种考证,阐述了冬虫夏草菌的分类学研究进展。根据分子系统学研究最新进展,在2007年,冬虫夏草的有性型及全型已归类为子囊菌纲、线形虫草科、线性虫草属Ophiocordyceps sinensis （Berk.）G. H. Sung, J.M.Sung, Hywel-Jones&Spatafora.,简写为Ophiocordyceps sinensis （Berk.） G.H. Sung et al.,建议药典对菌的基原物种进行更新。通过对冬虫夏草虫体基原品种考证发现,目前冬虫夏草虫体品种为59种,大多数学者公认冬虫夏草菌的寄主昆虫集中在Hepialidae蝠蛾属Hepialus田首次对中药冬虫夏草的命名进行系统的研究,对历版中国药典及相关文献进行分析,表明“冬虫夏草”作为药材中文名比较客观、合适,但专属性不强；中药冬虫夏草应与冬虫夏草菌区别,其药材的拉丁名不应直接等同于冬虫夏草菌的属名,建议结合虫体部位与冬虫夏草菌最新学名进行药材命名：Ophiocordyceps Hepialus。2、冬虫夏草蛋白质2-DE方法优化与特征性蛋白的鉴定在课题组前期研究的基础上,本论文进一步对适用于冬虫夏草蛋白2-DE方法进行考察,得到了最佳方法条件：（1）上样量600μg（2）被动水化方式（3）搭建盐桥进行深度除盐；重现性研究结果显示该方法对同一产地同一批次样品的匹配率达到89.5%,表明该方法稳定可靠。首次对冬虫夏草2-DE过程中蛋白含量测定方法进行研究,确定了Bradford法是作为冬虫夏草可溶性蛋白检测的最适方法。通过研究了不同产地冬虫夏草蛋白表达图谱的差异性、共同性,找出了特征性蛋白点12个,并对其中的5个进行了初步的结构鉴定,结构鉴定结果为：乙酰乳酸合成酶小亚基类、转录修复偶联因子类、假设蛋白Mnod₇043类、FMN依赖的a-羟基酸脱氢酶类、铁硫氧化还原酶类蛋白类。首次对不同产地冬虫夏草进行多样性分析（差异性蛋白、共有蛋白）,结果表明不同产地正品冬虫夏草蛋白种类差异较大,结合前面品种研究,认为冬虫夏草蛋白的多样性与不同产地优势冬虫夏草菌寄主昆虫的种类有关。这为后续通过冬虫夏草特征性蛋白的对不同冬虫夏草产地溯源奠定了基础：同时提出通过寻找不同来源正品中药的共有蛋白来建立合适的特征性蛋白质表,对多基原中药以及复合物中药质量评价研究提供一条参考思路。3、首次对冬虫夏草中免疫活性蛋白进行研究利用酶联免疫法测定药物对巨噬细胞分泌TNF-a、IL-1、IL-12因子的影响,对冬虫夏草蛋白组分的免疫活性进行研究,优化了体外免疫活性检测的方法：分离得到小鼠腹腔巨噬细胞,培养3h细胞贴壁后给药,LPS（作为后期实验的阳性对照）给药终浓度为10μg·ml-1,给药9h后终止反应,弃掉营养培养基,更换双无培养基,细胞分泌36h后离心,取出上清液即得分别含有TNF-α、IL-1、 IL-12因子的待测样品。试验应在小鼠腹腔巨噬细胞提取纯化后72h内完成。首次对冬虫夏草蛋白组分的稳定性进行了研究,筛选出适合的蛋白组分保存条件：缓冲液PB（pH=7.2,0.45mmol·L-1DTT）作为冬虫夏草蛋白保存液,保存温度为-20℃,保存时间10d。首次通过结合免疫活性跟踪,对冬虫夏草蛋白进行超滤分离,得到4个分子量段,超滤效果较好。免疫活性检测结果表明,冬虫夏草蛋白总提物以及各分子量段蛋白组分对巨噬细胞免疫系统总体表现出多方面的双向调节,包括（1）功能性的双向调节,即不同分子量段对正常巨噬细胞具有一定促进、抑制作用或作用不明显：对免疫状态低下的细胞（β-巯基乙醇造模损伤）,能显著的促进免疫因子的分泌接近正常水平或具有免疫促进作用的的趋势；对免疫状态过度旺盛的细胞（LPS刺激）,能显著的抑制免疫因子的分泌接近正常水平或具有免疫抑制作用的趋势；（2）剂量性双向调节,不同分子量段蛋白样品对免疫因子的调节,没有呈显著的线性关系,但总体上、在一定浓度范围内表现为高浓度促进免疫、低浓度抑制免疫的双向调节作用（3）不同分子量趋势性双向调节,虽然不同分子量段蛋白组分对不同免疫因子表现为不同的免疫调节作用,总体上分析发现,大分子量蛋白组分主要表现为免疫促进作用,随着分子量的降低,免疫抑制作用越明显。通过凝胶层析法对冬虫夏草蛋白组分进行了初步分离,得到了表现为免疫抑制作用、活性较强、重现性好、蛋白种类较为单一、分子量在14.4-20.1kDa的蛋白组分III,为后期活性蛋白的高通量筛选提供依据。通过对冬虫夏草特征性蛋白与活性蛋白的研究,即从鉴别成分与有效成分的角度,对冬虫夏草的质量评价的研究进行了探索,为后期指标性蛋白或蛋白组分寻找奠定基础,为冬虫夏草质量评价从蛋白组分的角度进行补充完善提供科学依据。