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本文主要从以下四个部分展开论述： 第一部分 实验性重症肌无力小鼠模型的研究 目的：采用纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors,AChR)免疫小鼠以建立实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)动物模型。 方法:用亲和层析法从电鳐电器官中提取和纯化AChR,并用其免疫C57BL/6小鼠,观察接种动物的临床症状,重复神经电刺激、血清乙酰胆碱受体抗体(AChRab)水平以及电镜下神经肌肉接头的情况。根据临床症状及重复电刺激试验结果将造模小鼠分为成模组及未成模组,并与弗氏佐剂对照组及正常对照组比较。 结果:与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组相比,成模组小鼠表现出肌力减弱的症状,重复神经电刺激(repetitive nerve stimulation,RNS)复合动作电位波幅幅度显著下降,发病小鼠血清抗体水平明显升高(P<0.01),电镜证实神经肌接头处突触后膜变平、皱褶减少。造模成功率为55％。 结论:用电鳐电器官提纯乙酰胆碱受体(TAChR)作为免疫原,能成功诱导产生EAMG小鼠模型。 第二部分 EAMG模型小鼠免疫功能状态的改变 目的:探讨EAMG模型小鼠免疫应答特点。 方法:根据临床症状及重复电刺激试验结果将造模小鼠分为成模组及未成模组,检测其免疫功能状态的改变,包括血清中AchRab的水平,脾脏CD4+T细胞数量,用淋巴细胞增殖试验检测脾细胞经刀豆蛋白A(ConA)活化的非特异增殖能力,检测脾脏T细胞细胞因子白细胞介素4(IL-4),干扰素γ(IFN-γ)分泌水平。并与弗氏佐剂(CFA)对照组及正常对照组进行比较。 结果:与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组相比,成模组小鼠自身抗体AchRab显著增高,脾脏CD4+T细胞数升高;外周脾细胞对ConA刺激的非特异性增殖能力显著升高;脾脏T细胞细胞因子IL-4,IFN-γ显著升高,均为P<0.01,IFN-γ升高的程度高于IL-4(P<0.01)。 结论:EAMG发生是一个自身免疫应答参与的过程,体液免疫、细胞免疫应答参与了实验性自身免疫性重症肌无力的发生。 第三部分 EAMG模型小鼠外周免疫耐受异常的研究 目的:探讨EAMG模型小鼠外周免疫耐受机制异常在疾病发生、发展中的作用。 方法:检测成模组小鼠CD4+脾细胞中CD4+CD25+T细胞(Treg)水平,脾细胞Foxp3 mRNA的表达情况,并与未成模组、弗氏佐剂组及正常对照组进行比较。 结果:与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组相比,成模组小鼠CD4+脾细胞内Treg的水平明显下降(P<0.01),脾细胞Foxp3 mRNA的表达降低(P<0.01)。 结论:EAMG小鼠模型存在外周耐受缺陷,FoxP3基因通过影响Treg的数量和功能在EAMG的发病中起了作用。 第四部分 EAMG模型小鼠中枢免疫耐受异常的研究 目的:探讨EAMG模型鼠中枢免疫耐受机制异常在疾病发生、发展中的作用 方法:检测成模组小鼠胸腺内Treg水平,胸腺细胞增殖能力,胸腺细胞因子分泌水平,胸腺内乙酰胆碱受体α1亚基基因表达水平,胸腺内AIRE的基因表达水平,并与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组进行比较。 结果:与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组相比,成模组小鼠胸腺内CD4+T细胞水平不变(P>0.05),而胸腺内Treg相对于CD4+细胞水平却明显下降(P<0.01)。胸腺细胞对ConA刺激的增殖能力增强(P<0.01),胸腺细胞IL-4、IFNγ分泌能力不变(P>0.05),胸腺内乙酰胆碱受体α1亚基基因表达水平显著减少(P<0.01)。胸腺内AIRE的表达水平明显下降(P<0.01)。 结论:EAMG小鼠模型存在中枢耐受缺陷,AIRE基因通过调节胸腺异位基因的表达在EAMG的发病中起了作用。