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目的：探讨各种游离脂肪酸（FFAs），包括软脂酸（PA）、硬脂酸（SA）、油酸（0A）、亚油酸（LA）和花生四烯酸（AA），以及胰岛素、瘦素和TNF-α对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）存活率的影响。方法：1．原代分离和培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。2．应用MTT比色法测定不同浓度的FFAs和其它试剂对HUVEC存活率的影响。3．用绿色荧光蛋白标记的膜联蛋白V／碘化丙啶（annexin V-FITC／PI）双染色法检测细胞凋亡和死亡。结果1．PA和SA在200μmol／L浓度的情况下处理细胞72h，细胞存活率约为对照组的45±5.3％，这种抑制细胞存活率的作用呈剂量和时间依赖性。100 Pmol／L的OA处理细胞48h，无细胞存活。LA对细胞的存活率几乎无影响。AA在2μmol／L时，处理细胞72h后，细胞存活率增加28±6.1％。2．多不饱和脂肪酸中的AA能部分阻断PA诱导的HUVEC死亡。3．细胞凋亡检测结果显示：100μmol／LPA作用细胞8h和200μmol／L作用4h，细胞出现凋亡峰，百分数分别为26.8％和12.23％，作用时间超过12h，细胞出现死亡峰。结论：饱和脂肪酸PA和SA以及单不饱和脂肪酸OA对血管内皮细胞有较强的毒性作用，而多不饱和脂肪酸中的AA则能部分阻断PA诱导的血管内皮细胞死亡。PA在低浓度和短时间内引起细胞凋亡，而高浓度和长时间处理细胞则引起细胞死亡。这些结果说明，不仅饱和脂肪酸的浓度，而且饱和脂肪酸和AA的浓度比例对血管内皮细胞的存活率均有重要意义。 目的：探讨FFAs引起的血管内皮细胞损伤的机制。方法：1．选择十三种可能阻断SFAs引起血管内皮细胞损伤作用的物质如：Ca2+载体（A32187）、Ca（2+）通道拮抗剂（Niferdofer）、神经酰胺阻断剂Fumonisin B1、PPARγ激动剂（Troglitazone）、PKC阻断剂（Bisindolylmaleimide）、PKA抑制剂（H89）、抑制K中国人民解放军军医进修学院内流的异黄酮（Genisitin）、前列腺素E:（P rostaglandinE）、抗氧化剂（劝taminE）、抑制蛋白合成的物质（M巴一7）、一氧化氮合酶阻断剂倒。一nitro几一a嗜nia)、一氧化氮供体（sNAp）等与血管内皮细胞株（E VC304）共同培养。2.MTT比色法测定SFAs（以软脂酸，PA为代表）与不同的药物相互作用时细胞的存活率，并与S狱s单独作用时相比较。结果:1.200林mo比趾和15林mo比LNNA（一氧化氮合酶阻断剂）共同作用组细胞的生存率较200林mo比PA单独作用组提高37.5%左右（P<口.01）。2一氧化氮供体单独作用组（10林m。比SNAP）及一氧化氮供体（10林mo比）与PA共同作用组，细胞生存率分别较对照组减少21%和22.5%（P<0.01）。3.200林mo比PA分别与加、50拼mol/Le皿作用时，细胞的生存率与200“mo况PA单独作用组比较未有显著性差异，阴>ao习。 4.不同浓度的ca2+载体、ca2+通道拮抗剂、PpARY激动剂、PKc阻断剂、PKA抑制剂、抑制K内流的异黄酮、前列腺素E:（PGEZ）、抗氧化剂（琉E）、抑制蛋白合成的NllJ一7分别与细胞作用，细胞的生存率与对照组比较未有显著性差异阴>a0J)。结论:过量的一氧化氮的产生可能是PA引起的血管内皮细胞损伤作用的原因之一。c扩+、PKc、PKA、ppARY和PGE:可能均未参与饱和脂肪酸引起的血管内皮细胞死亡过程。 一氧化氮合酶在饱和脂肪酸引起的内皮细胞损伤中的作用 摘要 目的:探讨饱和脂肪酸（SEAs）引起的血管内皮细胞死亡过程中，一氧化氮产生过量的原因。方法:1.细胞免疫组织化学方法检测正常状态和高浓度的饱和脂肪酸作用下内皮型（eNOS）及诱导型（汹05）一氧化氮合酶在血管内皮细胞中的分布情况。2.逆转录PCR和酶联免疫法分别检测血管内皮细胞暴露于SFAs后eNOS和iNOS基因、蛋白表达量的变化以及这些变化与PA的关系。结果:1.细胞免疫组织化学结果显示:正常情况下eNOS有较强的表达，iNOS表达极低，eNOS和iNOS发挥作用的位置主要位于细胞浆内，少部分在细胞核内。2.RI飞PCR法结果显示:SFAs作用内皮细胞后24h，与正常对照组中国人民解放军军医进修学院相比iNOS mRNA表达增强，48h达高峰，96h后开始减弱印<0.05)。而PA作用最初eNOS 1llRNA表现为增强，短时间内很快明显出现明显降低，与正常对照组相比差异显著（P<0.05）。3酶联免疫法检测结果显示:SFAs作用于内皮细胞后，iNOs和eNOS蛋白的表达量与mRNA表达量变化趋势基本一致。4一氧化氮合酶阻断剂（LNNA）作用于细胞后汹05蛋白表达量明显下降而d呵05蛋白表达量未有明显变化。结论:SFAs刺激后血管内皮细胞iNOS和eNOS n1RNA和蛋白表达量均发生明显变化，这种变化始于转录水平。在sFAs引起细胞损伤过程中汹05的表达增强占主导地位，eNOS表达降低的幅度和持续时间均远低于iNOS升高幅度。LNNA以阻断iNOS的表达为主，对eNOS表达的影响甚微。糖耐量受损和2型糖尿病患者血清游离脂肪酸的变化及其与动脉粥样硬化关系的探讨 摘要 目的:观察糖耐量受损和2型糖尿病患者血中FFAs水平的变化及其与颈动脉内一中膜厚度、动脉斑块发生率的关系，探讨FFAs在2型糖尿病动脉粥样硬化（AS）发生过程中的作用和意义。方法:测定糖耐量正常（NGT，N七20）受试者、糖耐量受损（IGT，N=20）和2型糖尿病患者（N=20）血中总游离