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目的调查某院临床分离的47株鲍曼不动杆菌对常用消毒剂和抗菌药物的耐药情况;检测耐药菌株的消毒剂和抗菌药物耐药基因,探讨消毒剂耐药和耐药基因之间的关系;分析具有高水平消毒剂耐药鲍曼不动杆菌临床菌株的同源性和流行病学特征;测定氯己定联合抗菌药物对多重耐药和泛耐药鲍曼不动杆菌的协同抗菌作用;为临床多重耐药鲍曼不动杆菌感染的治疗和控制传播提供实验数据。方法采用二倍琼脂稀释法和微量肉汤法分别测定21种抗菌药物与6种常用消毒剂对47株临床分离鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。PCR检测消毒剂耐药基因和抗菌药物耐药基因:adeB、adeG、adeJ、abeD、abeM、amvA、adeT1、adeT2、qacE、qacEΔ1、abuO、qacEΔ1-sul1、fabI、aceI、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58;实时荧光定量PCR(quanitative real time PCR,qRT-PCR)检测外排泵基因adeB、adeG、adeJ、abeD、abeM、aceI和三氯生靶点基因fabI的表达情况。脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)与多位点序列分型技术(multilocus sequence typing,MLST)分析消毒剂高水平耐药鲍曼不动杆菌临床菌株的流行病学特征。棋盘法测定氯己定联合左氧氟沙星、环丙沙星、米诺环素、多西环素、亚胺培南和美罗培南对多重耐药(multidrug resistant,MDR)和泛耐药(extensively drug resistant,XDR)鲍曼不动杆菌联合抗菌活性。结果1.抗菌药物药敏结果显示,多重耐药菌株6株(12.77%),泛耐药菌株24株(51.06%)。对碳青霉烯类和三代头孢耐药率大于60%。对替加环素和多粘菌素敏感率为100%。消毒剂药敏结果显示,醋酸氯己定MIC范围为8~128μg/ml,苯扎溴铵MIC范围为4~32μg/ml,乙醇MIC范围为7.5~22.5%,双氧水MIC范围为47~376mM,三氯生MIC范围为2~256μg/ml,次氯酸钠MIC范围为160~640μg/ml。鲍曼不动杆菌对三氯生、醋酸氯己定、乙醇、过氧化氢和苯扎溴铵敏感性降低,对三氯生与氯己定敏感性降低最严重。2.抗菌药物耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58检出率分别为63.83%、0、93.62%、0。消毒剂耐药基因adeB、adeG、adeJ、abeD、abeM、amvA、adeT1、adeT2、fabI、aceI、qacE和qacEΔ1检出率均高于68.09%;abuO的检出率仅2.13%。adeJ、abeD、fabI和aceI耐药基因存在于所有检测菌株中。三氯生耐药菌株表现出adeB和adeJ表达相对增加,而醋酸氯己定耐药菌株abeM和fabI基因表达相对增加。亚抑制浓度三氯生诱导下adeB、adeJ、adeG和fabI表达增加约3倍。亚抑制浓度醋酸氯己定诱导后只有adeB表达提高了4倍。仅一株三氯生耐药菌株检测到FabI的Gly95Ser突变。3.14株临床菌株中鉴定出ST92、ST195、ST184、ST618和4个新型ST型:ST1277、ST1278、ST1279、ST1280。ST92是主要ST型;ST92和ST195属于克隆复合体(clone complex,CC)92,是医院的主要克隆复合体。检测出2种不同脉冲型,其中2株菌株属于脉冲A型,3株菌株属于脉冲B型;9株菌株属于不同脉冲型。同时,CC92与脉冲B型相关联。4.棋盘法测定结果显示,醋酸氯己定联合米诺环素、多西环素、环丙沙星和美罗培南协同指数FICI≤0.5菌株超过50%,表现为协同作用。醋酸氯己定联合左氧氟沙星和亚胺培南协同指数0.5<FICI≤1的菌株超过66.67%,表现为相加作用。结论1.临床分离鲍曼不动杆菌耐药情况严重,仅对多粘菌素和替加环素敏感。鲍曼不动杆菌对常用消毒剂三氯生、醋酸氯己定、苯扎溴铵、过氧化氢和乙醇敏感性降低。2.鲍曼不动杆菌多重耐药菌和泛耐药菌株的出现与OXA-23、OXA-51及外排泵基因adeB、adeG、adeJ存在相关性。鲍曼不动杆菌对消毒剂的敏感性降低与外排泵具有一定相关性。3.流行病学分析结果表明,CC92是高水平消毒剂耐药鲍曼不动杆菌的主要流行克隆复合体。4.醋酸氯己定联合多种抗菌药物具有协同或相加的抗菌活性。