论文部分内容阅读
目的:观察心房颤动(Atrial fibrillation,AF)对心肌细胞自噬及心肌纤维化的影响,进一步探讨通过诱导AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)活性抑制自噬改善房颤诱导的心肌纤维化。方法:12只比格犬经随机区域分组分为4组:窦性心律组(Control)、AF组、二甲双胍(Metformin,MET)+房颤组、迷走神经刺激(vagus nerve stimulation,VNS)+房颤组(n=3只/组)。其中对照组:予以假手术处理,不予以起搏;AF组:于麻醉下剪开心包,于右心耳处缝合自制双极电极并连接高频刺激仪,以10V,40 Hz,75 ms快速起搏右心耳24小时,制造阵发性房颤模型;MET+AF组:予以MET(100 mg/kg,加入每天饮用水)口服7天,再予以右心耳快速起搏24小时;VNS+AF组:比格犬共同被VNS刺激及右心耳快速起搏24小时。造模成功后,予以空气栓塞法处死比格犬,立即开胸采集左心房样本。使用蛋白印迹法(Western Blotting)测AMPK、α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,a-SMA)、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)、自噬相关蛋白p62和Beclin-1水平,使用免疫荧光检测细胞内p62、AMKP和Beclin-1蛋白水平,使用HE染色及Masson染色观察比格犬左心房胶原纤维沉积。结果:1.与对照组相比,AF组中p62蛋白表达水平明显下降,Beclin-1、LC-3I、LC-3II蛋白表达水平及LC-3II/LC-3I比值明显升高(P<0.05);荧光免疫结果显示AF组Beclin-1荧光强度强,p62荧光强度弱。提示房颤诱导心肌自噬水平增加。2.与对照组相比,AF可显著减低p-AMPK(phosphorylation AMPK,p-AMPK)的蛋白表达,给予MET及VNS处理后可改善AF所致的p-AMPK减低。3.与AF组相比,给予MET及VNS处理后减低Beclin-1表达及LC3-II/LC3-I比值,提高p62的表达(P<0.05),提示MET及VNS处理可降低AF诱导的自噬。4.HE染色及Masson染色结果显示:与对照组相比,AF组中HE染色可见组织疏松及较多胶原纤维样物质,Masson染色可见较多的蓝色胶原纤维;与AF组相比,Met+AF组和VNS+AF组中HE染色可见组织排列较紧密,胶原纤维样物质减少,Masson染色可见较少的蓝色胶原纤维。与对照组相比,AF组中a-SMA表达水平明显升高(P<0.05);与AF组相比,Met+AF组及VNS+AF组中a-SMA表达水平明显下降(P<0.05)。说明房颤诱导心肌纤维化,激活AMPK后可改善房颤所致的心肌纤维化。结论:1.房颤可诱导心肌细胞自噬水平升高并可诱导心肌纤维化。2.诱导AMPK表达可能通过抑制心肌细胞自噬,从而改善房颤所致的心肌纤维化。