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第一部分：神经病理性疼痛大鼠背根神经节TRPM8表达变化的研究目的：观察慢性神经病理性疼痛大鼠背根神经节瞬时感受器电位melastatin 8 (TRPM8)表达的变化。方法：健康成年雄性SD大鼠72只,体重250-280g,随机分为坐骨神经慢性束缚性损伤(CCI)组和假手术组(n=36),CCI或假手术前1d,术后1、4、7、10、14d每组各随机取6只大鼠,测定冷痛阈值、机械痛阈值和热痛阈值后立即处死大鼠,取术侧L5背根神经节行免疫组织化学染色,观察TRPM8在慢性神经病理性疼痛下的表达变化。结果：CCI组于术后4d术侧冷痛阈值、机械痛阈值和热痛阈值开始下降,至术后14d仍处于较低水平,冷痛阈值和热痛阈值于术后10d降至最低,机械痛阈值术后14d降至最低(P<0.05或P<0.01)；CCI组术侧L5背根神经节TRPM8蛋白的表达于术后4d开始增加,术后10d达到高峰,至术后14d仍维持在高水平(P<0.05或P<0.01)。结论：背根神经节TRPM8受体表达的上调参与神经病理性疼痛的发生和维持。第二部分：薄荷醇和TRPM8反义寡核苷酸对神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏和背根神经节TRPM8表达的影响目的：观察鞘内注射薄荷醇或TRPM8反义寡核苷酸对CCI大鼠痛觉过敏和TRPM8表达水平的影响,探讨TRPM8通道在神经病理性疼痛发生机制中的作用。方法：第1部分：鞘内置管成功的SD大鼠32只,随机分为4组(n=8)：假手术+生理盐水组(A组)；假手术+薄荷醇组(B组)；CCI+生理盐水组(C组)；CCI+薄荷醇组(D组)。鞘内置管后5d制备CCI或假手术模型,CCI或假手术后14d鞘内单次注射生理盐水20μl或薄荷醇100μg/kg。置管后行CCI或假手术前、术后14d给药前和给药后分别测定大鼠患肢冷板抬足次数、50%缩足反射阈值和热板缩足反射潜伏期。术后14d行为学测试后立即处死大鼠,取患侧L5背根神经节,用免疫组织化学和western blot方法检测背根神经节中TRPM8蛋白的表达水平。第2部分：鞘内置管成功的SD大鼠32只,随机分为4组(n=8)：假手术+TRPM8错义寡核苷酸组(E组)；假手术+TRPM8反义寡核苷酸组(F组)；CCI+TRPM8错义寡核苷酸组(G组)；CCI+TRPM8反义寡核苷酸组(H组)。鞘内置管后5d制备CCI或假手术模型,CCI或假手术后9-13d连续5d鞘内注射TRPM8反义或错义寡核苷酸,每天2次,每次60μg/kg。置管后行CCI或假手术前、术后8d以及术后14d分别测定大鼠患肢冷板抬足次数、50%缩足反射阈值和热板缩足反射潜伏期。术后14d行为学测试后立即处死大鼠,取患侧L5背根神经节,用免疫组织化学和western blot方法检测背根神经节中TRPM8蛋白的表达水平。结果：第1部分：薄荷醇明显减弱CCI大鼠的机械和热痛觉过敏症状,显著加强CCI大鼠的冷痛觉过敏程度。薄荷醇对假手术大鼠的机械、热、冷痛觉过敏没有明显影响。两CCI组大鼠背根神经节TRPM8蛋白的表达水平明显高于两假手术组大鼠,薄荷醇单次鞘内注射对CCI和假手术大鼠背根神经节TRPM8蛋白的表达水平皆无明显影响。第2部分：TRPM8反义寡核苷酸减弱了CCI大鼠的冷痛觉过敏,但对CCI大鼠的机械和热痛觉过敏没有明显影响。TRPM8反义寡核苷酸对假手术大鼠的冷、热和机械痛敏均没有明显影响。TRPM8反义寡核苷酸明显减少CCI和假手术大鼠背根神经节TRPM8蛋白的表达,且使两者降至同一水平。TRPM8错义寡核苷酸对CCI和假手术大鼠背根神经节TRPM8蛋白的表达水平无明显影响。结论：第1部分：薄荷醇通过激活TRPM8信号转导通路对神经病理性疼痛大鼠的机械和热痛敏产生抑制作用,对其冷痛敏产生增强作用。TRPM8信号转导通路的激活对假手术大鼠的冷痛敏、机械痛敏和热痛敏均没有明显影响。第2部分：TRPM8反义寡核苷酸通过下调背根神经节TRPM8蛋白的表达,对神经病理性疼痛大鼠的冷痛觉过敏产生抑制作用。第三部分：薄荷醇和TRPM8反义寡核苷酸与神经病理性疼痛反应的量效关系目的：建立薄荷醇和TRPM8反义寡核苷酸的剂量反应曲线,确定薄荷醇激活TRPM8和TRPM8反义寡核苷酸抑制TRPM8的半数有效剂量(ED50)和95%有效剂量(ED95)。方法：第1部分：鞘内置管成功的SD大鼠70只,随机分为7组：生理盐水组以及6个薄荷醇不同剂量组,每组10只。鞘内置管后5d制备CCI模型,CCI模型建立后14d生理盐水组鞘内单次注射生理盐水20μl,6个薄荷醇组分别单次注射薄荷醇100.00、79.43、63.10、50.12、39.81和31.62μg/kg。采用概率单位回归分析建立不同剂量薄荷醇的量效关系直线方程,计算薄荷醇的ED50和ED95。第2部分：鞘内置管成功的SD大鼠70只,随机分为7组：生理盐水组以及6个TRPM8反义寡核苷酸不同剂量组,每组10只。鞘内置管后5d制备CCI模型,CCI模型建立后9-13d生理盐水组连续5d鞘内注射生理盐水,每天2次,每次20μl,6个TRPM8反义寡核苷酸组连续5d注射TRPM8反义寡核苷酸,每天2次,每次的注射剂量分别为60.00、47.66、37.86、30.07、23.89和18.97μg/kg。采用概率单位回归分析建立不同剂量TRPM8反义寡核苷酸的量效关系直线方程,计算TRPM8反义寡核苷酸的ED50和ED95。结果：薄荷醇的ED50和ED95分别为56.24μg/kg(95%置信区间为49.66-63.68μg/kg)和86.09μg/kg(95%置信区间为73.43-121.18μg/kg)。TRPM8反义寡核苷酸的ED50和ED95分别为31.37μg/kg(95%置信区间为27.85-35.37μg/kg)和46.34μg/kg(95%置信区间为39.87-64.65μg/kg)。结论：概率单位回归分析所算得的薄荷醇激活TRPM8的ED50和ED95分别为56.24μg/kg和86.09μg/kg,TRPM8反义寡核苷酸抑制TRPM8的ED50和ED95分别为31.37μg/kg和46.34μg/kg。