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目的构建含有pEGFP-C1-PNP质粒的减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株，检测其在胰腺癌细胞BxPc-3中的表达。探讨减毒沙门氏菌作为载体介导PNP/MePdR自杀基因系统对胰腺癌细胞BxPc-3的杀伤作用。方法1. PCR扩增得到PNP基因，构建真核表达载体pEGFP-C1-PNP，并进行酶切、PCR、和测序鉴定。利用电转化法将重组质粒转入减毒沙门氏菌SL3261，进行细菌形态学和表面抗原稳定性检测。含质粒SL3261菌株与胰腺癌细胞BxPc-3体外共培养，利用荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP的表达和PNP基因的转录。2.将携带PNP基因的减毒沙门氏菌SL3261与胰腺癌细胞BxPc-3体外共培养，加入前体药物MePdR，MTT法检测MePdR对BxPc-3细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果1.目的基因正确连接pEGFP-C1中，并成功转入减毒鼠伤寒沙门氏菌，感染细胞亦检测到目的基因表达。2.受SL3261/pEGFP-C1-PNP感染的BxPc-3细胞对MePdR很敏感，作用5天后其IC50为0.1mg/L。当MePdR浓度为1mg/L时，受SL3261/pEGFP-C1-PNP感染的细胞半数死亡发生在加药后第三天。5%的PNP阳性细胞与95%的非阳性细胞混合，就可使多数细胞被杀死。结论成功构建了能携带ePNP基因真核表达质粒的SL3261菌株，且能在胰腺癌细胞中正确表达。减毒沙门氏菌作为载体介导PNP/MePdR自杀基因系统对胰腺癌细胞具有杀伤作用，且旁观者效应明显。