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目的：
巩膜是近视的最终效应器。A2A受体基因敲除小鼠在生后发育过程中出现明显的相对近视，同时伴有眼轴的延长和后极部巩膜胶原纤维直径变细。本研究建立了巩膜特异性A2A受体基因抑制小鼠模型，从而确定小鼠巩膜成纤维细胞中腺苷A2A受体在小鼠屈光发育中的作用。通过以上的研究，将有助我们深入理解腺苷A2A受体在近视发生发展过程中的作用与调控机制，提高针对A2A受体疗法改善近视发展的可能性，为近视的药物治疗奠定基础。
方法：
采用基于Cre/loxP技术的选择性基因敲除方法建立巩膜特异性A2A受体基因抑制小鼠。应用条件型A2A受体基因敲除小鼠（A2Af/f，即在A2A受体基因exon2两端插入两个loxP序列），将改建的腺相关病毒AAV-Cre载体于Tenons囊下注射到小鼠巩膜组织周围，利用局部AAV-Cre表达的Cre酶将两个loxP序列之间的A2A受体基因exon2剔除掉，从而实现巩膜特异性A2A受体基因抑制。我们通过小鼠Tenons囊下注射AAV，筛选出可以高效感染小鼠巩膜的血清型，据此构建AAV-Cre载体。为了验证AAV-Cre的作用，另由于纹状体高表达A2A受体基因，本实验通过将AAV-Cre载体注射到A2Af/f小鼠纹状体，检测AAV-Cre能否特异性抑制A2A受体基因。
采用出生后21日龄A2Af/f小鼠作为实验动物，随机分成AAV-Cre组、AAV对照组两组。AAV-Cre组和AAV对照组小鼠均取一只眼睛进行Tenons囊下注射腺相关病毒，对侧眼不作任何处理。分别在注射前、注射后2周、4周和6周应用红外偏心验光仪(EIR)检测A2Af/f小鼠屈光度，光学相干断层扫描仪(OCT)检测A2Af/f小鼠眼球生物学参数，包括角膜厚度、前房深度、晶状体厚度、玻璃体腔深度、视网膜厚度及眼轴长度等，角膜曲率计检测角膜曲率以及体重的测量等。在AAV-Cre注射后6周取材，应用RT-qPCR检测A2Af/f小鼠巩膜A2A受体和胶原Ⅰ，Ⅲ，Ⅴ在mRNA水平的变化。
结果：
1 AAV1-EGFP感染小鼠巩膜结果显示Tenons囊下注射AAV1-EGFP后，EGFP仅在小鼠巩膜表达，而在视网膜不表达，表明腺相关病毒血清型1可以高效感染小鼠巩膜;
2 AAV1-EGFP感染A2Af/f小鼠纹状体后有丰富的EGFP表达，AAV1-Cre感染A2Af/f小鼠纹状体后，可以使纹状体A2A受体mRNA的表达下降约43％;
3AAV1-Cre感染A2Af/f小鼠巩膜6周后，可以使巩膜A2A受体mRNA的表达下降约57.5％;
4 A2Af/f小鼠Tenons囊下注射AAV1-Cre2周、4周和6周后，AAV1-Cre注射眼与对侧眼及AAV1注射眼相比，屈光度、角膜前表面中央曲率、玻璃体腔深度和眼轴长度等生物学参数均无明显差异;
5 AAV1-Cre感染A2Af/f小鼠巩膜6周后，巩膜胶原Ⅰ，Ⅲ，ⅤmRNA的表达无明显变化。
结论：
A2Af/f小鼠Tenons囊下注射AAV1-Cre可以特异性抑制小鼠巩膜成纤维细胞上的腺苷A2A受体基因，使其mRNA表达下降近57.5％，这表明我们成功构建了巩膜特异性A2A受体基因抑制小鼠。然而与对侧眼及AAV1注射眼相比，屈光度及玻璃体腔深度、眼轴长度等生物学参数均无明显差异，可能是由于AAV1-Cre感染巩膜特异性抑制A2A受体的效率较低，不足以使A2Af/f小鼠出现近视的特征性的变化;或是由于5周龄后小鼠近视已经开始恢复，故并不能够对屈光及眼轴产生影响。