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肿瘤严重威胁着人类的健康。治疗肿瘤的传统方法包括手术、化疗、放疗,虽然取得了不可估量的成效,但是距离彻底根治肿瘤还很遥远。近十几年来,人们将彻底根治肿瘤的希望寄托于基因治疗。早有学者预言,肿瘤的基因治疗将是人类征服恶性肿瘤的根本途径。目前,肿瘤基因治疗有代表性的一个药物是重组人p53腺病毒注射液—今又生。其作为世界上第一个获得正式批准的基因治疗药物,的确为一些肿瘤患者带来了希望。然而,p53抑癌基因并非对肿瘤细胞具有广谱的杀伤和抑制效应,因此,寻找对肿瘤细胞杀伤和抑制效应更为有效的目的基因也早已成为肿瘤基因治疗的研究热点之一。p53AIP1基因是2000年日本一个研究小组首先发现的p53基因下游的促凋亡靶基因,其能够抑制肿瘤的生长,促进肿瘤细胞的凋亡。p53AIP1基因促凋亡作用可能强于p53基因本身,并对p53抗性(p53+/+)的肿瘤细胞有促凋亡作用。本研究利用AdMax Adenoviral Vector System,将外源性p53AIP1基因置于MCMV启动子下游,插入穿梭载体质粒中。插入外源p53AIP1基因的穿梭载体与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre在HEK293细胞中共转染,通过Cre-loxP重组酶系统,发生定点重组,从而产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺捕?Ad-p53AIP1)。选择纯化的重组腺病毒Ad-p53AIP1作为目标病毒,感染含有野生型p53基因的人肝癌细胞系HepG2和人宫颈癌细胞系HeLa。经体外试验,包括MTT比色实验、Western Blotting检测、流式细胞术分析、罗丹明染色、Hoechst 33258核染色、瑞氏—吉姆萨染色以及电镜观察,证实Ad-p53AIP1对肿瘤细胞有细胞周期阻滞的作用,并验证了其诱导肿瘤细胞发生凋亡的功能。经试验亦可看出,Ad-p53AIP1对体外作用后的小鼠乳腺癌细胞株4T1的体内成瘤有非常明显的抑制作用,并对体内瘤体的生长起到一定的抑制作用。另外,Ad-p53AIP1能反向上调p53蛋白的表达,下调MDM2基因的表达水平,同时还可影响p21等细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达变化。研究结果表明,Ad-p53AIP1可以通过调节细胞周期的进程抑制肿瘤细胞的生长,Ad-p53AIP1能够促进p53抗性(p53+/+)的肿瘤细胞发生凋亡。p53AIP1作为p53基因调控的下游促凋亡靶基因,有反向调控p53蛋白上调表达的作用,这在之前的文献中没有报道。其可能的作用机制为,Ad-p53AIP1可以抑制MDM2基因的表达,表达下调的MDM2蛋白解除了其对p53蛋白的降解和抑制功能,导致p53蛋白水平的上调表达。外源性的野生型p53基因可以诱导肿瘤细胞p53AIP1基因的表达,反之,外源性的p53AIP1基因可以诱导肿瘤细胞p53基因在蛋白水平的上调表达。因此,二者在肿瘤细胞中形成一种相互诱导表达的作用模式,以调节肿瘤的细胞周期进程并促进肿瘤细胞的凋亡。这两种基因相互诱导表达的作用模式能够为其将来应用于肿瘤的临床治疗提供理论基础,也有可能成为一种治疗肿瘤的新策略。