【目的】　　1. 筛选糠秕、球形马拉色菌感染 THP-1、HaCat、SZ95 皮脂腺细胞模型中最佳感染条件，为后续炎症小体研究提供依据。　　2. 寻找马拉色菌感染细胞模型中实用染色方法。　　【方法】　　1. 马拉色菌及细胞培养：用改良Leeming-Notman培养基培养糠秕马拉色菌标准株（CBS1878）、球形马拉色菌标准株（CBS9597），用PBS调整菌悬液浓度至1×109个孢子/ml。THP-1细胞用25 nM佛波酯RPMI-1640完全培养基诱导分化为巨噬细胞。HaCat细胞、SZ95细胞分别用DMEM完全培养基、Sebomed完全培养基培养。　　2. 感染方法：10~40个感染复数（MOI）糠秕或球形马拉色菌加入THP-1、HaCat和SZ95细胞中培养6~48 h。　　3. 染色方法：40 MOI糠秕马拉色菌感染HaCat细胞12~24 h，用下述染色方法观察细胞内外孢子。半薄切片作过碘酸-雪夫（PAS）染色，细胞爬片作瑞氏-吉姆萨（Wright-Gimesa）染色、双荧光染色［钙荧光白（CFW）+DiO、CFW+DiI、CFW+ 鬼笔环肽、FUN-1+DAPI］、三荧光染色［CFW+DiI+ 吖啶橙（AO）、CFW+ 鬼笔环肽 +AO、CFW+ 鬼笔环肽 +DAPI、CFW+Actin-Trakcer Green+ DAPI、FUN-1 + 鬼笔环肽 + DAPI、异硫氰酸荧光素标记麦胚凝集素（FITC-WGA）+ 鬼笔环肽 +DAPI］。　　4. 孢子吞噬率：采用CFW+DiI荧光染色、半薄切片PAS染色，高倍镜（×400）下观察250个细胞，内吞孢子阳性细胞百分率代表孢子吞噬率。　　5. 半胱天冬酶（Casp）-1检测：20 MOI糠秕、球形马拉色菌感染THP-1细胞，30 MOI糠秕、20 MOI球形马拉色菌感染HaCat细胞，30 MOI糠秕、球形马拉色菌感染SZ95细胞，Western blot检测4个时间点Casp-1水平。　　6. 统计学方法：采用SPSS 22.0软件进行统计。染色方法比较用卡方检验，最佳MOI筛选用Jonckheere-Terpstra检验，Casp-1水平用单因素方差分析。　　【结果】　　1. 染色方法的筛选：PAS染色、CFW+DiI双荧光染色可清晰显示细胞内外孢子，但瑞氏-吉姆萨染色、其它荧光染色不能清晰显示。CFW+DiI荧光染色与半薄切片PAS染色计算细胞内孢子吞噬率，卡方检验差异无统计学意义（P>0.05）。　　2. 马拉色菌感染细胞中孢子吞噬率：4个不同MOI糠秕、球形马拉色菌感染THP-1、HaCat、SZ95细胞6~48 h，孢子吞噬率随感染时间延长而升高，一般在24~48 h达高峰（P<0.05）。糠秕、球形马拉色菌感染THP-1细胞时，20~40 MOI组孢子吞噬率在6~24 h明显高于10 MOI组（P<0.05），而30 MOI组孢子吞噬率一般与20 MOI组相比差异无统计学意义（P>0.05）。在HaCat细胞中，30、40 MOI糠秕马拉色菌感染所致孢子吞噬率在12 h、24 h一般明显高于10、20 MOI组（P<0.05），而20~40 MOI球形马拉色菌感染所致孢子吞噬率在6~24 h明显高于10 MOI组（P<0.05）。在SZ95细胞中，30、40 MOI糠秕马拉色菌感染所致孢子吞噬率在6~48 h明显高于10、20 MOI组（P<0.05），而30、40 MOI球形马拉色菌感染所致孢子吞噬率仅在6 h、24 h明显高于10、20 MOI组（P<0.05）。　　3. Casp-1水平变化：糠秕、球形马拉色菌感染THP-1、HaCat、SZ95细胞后Casp-1水平随时间延长而增加，其中球形马拉色菌感染THP-1细胞在12 h达高峰（P<0.05），余者在24 h达高峰（P<0.05），48 h均明显减少。　　【结论】　　1. 半薄切片PAS染色和CFW+DiI荧光染色均可清晰显示细胞内外孢子，但CFW+DiI荧光染色简单易行，适用于检测细胞模型中马拉色菌感染情况。　　2. 以MOI较小、孢子吞噬率较高为准，糠秕、球形马拉色菌感染THP-1细胞的最佳MOI为20；糠秕、球形马拉色菌感染HaCat细胞的最佳MOI分别为30、20；糠秕、球形马拉色菌感染SZ95细胞的最佳MOI为30。　　3. 以达到Casp-1最高水平为准，球形马拉色菌感染THP-1细胞的最佳时间点为12 h，余者均在24 h。