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乳铁蛋白(LTF)是一种分子量约为80kDa的糖蛋白,属于转铁蛋白家族成员之一,具有多种生物学功能,如调节铁的吸收,抗病原微生物,抗肿瘤与免疫调节作用。在正常情况下,体内LTF含量较低,但是在患有类风湿性关节炎(RA)的关节液中,LTF水平会明显升高。抗LTF抗体是抗中性粒细胞胞浆抗体的一种,在一些自身免疫病如系统性红斑狼疮(SLE)和RA等病人血清中抗LTF抗体含量较高。然而,乳铁蛋白免疫复合物(LTF-IC)在RA病人体内的表达是否升高及其在RA的发生发展过程中发挥怎样的作用尚不清楚。 本研究在RA病人血清中LTF-IC含量增加的基础上系统地研究了LTF-IC对人单核细胞的免疫学功能,并对其机制进行了深入探讨。结果发现LTF-IC能够在体外活化人单核细胞分泌促炎性细胞因子,包括TNF-α、IL-1β和IL-8,但不能产生IL-10和IL-12。不同组成的LTF-IC,无论是由多克隆抗体还是单克隆抗体所组成的LTF-IC均具有这种功能。肝素能够阻断LTF与人单核细胞的结合,在LTF-IC刺激人单核细胞的培养体系中加入肝素能够明显抑制LTF-IC对人单核细胞的刺激作用。并且加入抗LTF受体的抗体去阻断LTF-IC的刺激作用,发现抗CD14的抗体具有很强的阻断作用。可见,LTF在LTF-IC的刺激作用中发挥着重要作用。然而,由生物素标记的LTF与亲和素结合形成的LTF多聚物却对人单核细胞没有明显的功能,证明LTF-IC发挥作用不是仅仅通过抗体交联乳铁蛋白来实现的。在培养体系中加入抗 Fcγ受体的抗体,发现抗FcγRII(CD32)的抗体也能明显抑制这种刺激作用。同时对乳铁蛋白抗体进行酶切,去除其Fc段后与LTF形成的复合物不再具有活化作用,因此, Fcγ受体在LTF-IC的刺激作用中也发挥重要作用,并且没有Fcγ受体的帮助是不足以诱导单核细胞活化的。据此我们推测,LTF-IC对人单核细胞的刺激作用可能是LTF受体和Fcγ受体共同介导的,二者缺一不可。 本文通过激光共聚焦的方法研究LTF-IC活化人单核细胞是否是通过内吞实现的。结果发现,与普通免疫复合物OVA-IC相比,LTF-IC更容易被内吞到细胞中,并且内吞抑制剂MDC能阻断这种现象。同时,Western-blot及信号通路抑制剂(NF-κB通路抑制剂及Casepase-1抑制剂)结果显示LTF-IC被单核细胞内吞后通过活化NF-κB等途径产生TNF-α,IL-1β等炎性细胞因子。检测了LTF-IC处理人单核细胞后对外来刺激剂的反应性。结果显示,LTF-IC处理后的单核细胞对其他刺激剂如LPS和Zymosan等的反应性明显上调,较普通复合物OVA-IC产生更多的细胞因子。进一步研究发现,这种细胞敏感性的增强可能与协同作用有关。而LTF-IC使细胞敏感性上调的特点,可能进一步增强RA病人体内的炎症反应,从而进一步加重病情。发现了LTF-IC对人单核细胞的免疫学功能并初步阐明了其发挥作用的分子机制。LTF-IC能够很强地活化人单核细胞并能增加细胞对其他刺激剂的敏感性,而这种刺激作用是通过细胞表面的LTF受体及Fcγ受体共同介导的内吞作用实现的。这些发现增加了我们对类风湿性关节炎等自身免疫病发生发展的理解,为人类研究自身免疫病的发病机制提供了新的思路。