论文部分内容阅读
目的:完善多重连接依赖式探针扩增技术,在MLPA方法检测假肥大型进行性肌营养不良患者基因缺失/重复突变及女性携带平台的基础上,结合病理组织学染色技术和免疫组化技术,进一步提高患者的检出率。探讨MLPA技术结合免疫组化技术对杜氏进行性肌营养不良(DMD)/贝氏进行性肌营养不良(BMD)患者进行鉴别诊断的临床应用价值,以及dystrophin基因突变与抗肌萎缩蛋白表达之间的相关性。方法:用多重连接探针扩增(MLPA)法检测2013年1月到2015年12月到云南省第一人民医院遗传诊断中心就诊的198例假肥大型进行性肌营养不良症疑似患者dystrophin基因的79个外显子的拷贝数情况。局麻下行开放式腓肠肌活检,观察组织的形态结构特点,将进行性肌营养不良患者与其他肌肉性疾病的患者区分开。采用免疫组织化学染色的方法检测患者腓肠肌组织中dystrophin蛋白的表达情况,鉴别诊断杜氏进行性肌营养不良(DMD)/贝氏进行性肌营养不良(BMD)患者。结果:采用MLPA的方法检测198例疑似患者的DMD基因突变情况。共检出128例不同突变,总体异常检出率在64.65%以上。其中160例受检男性当中,共检出缺失突变95例,占59.38%;检出重复突变6例,占3.75%。在38例受检女性当中,缺失型女性携带25例,占65.79%;重复型女性携带2例,占5.26%。分析所得数据发现,本次研究中突变频率最高的区域集中在第45-54外显子区域,占总突变频率的46.59%,并且其中109例突变发生在中央棒状区域(包括104例缺失突变,5例重复突变,),占总突变的85.16%(109/128例),这与之前的文献报道相一致。128例检出突变的受检者中,95例突变属于框外突变,28例突变属于框内突变,另外5例突变涉及到第1或第79外显子,因此对阅读框结构的影响不太明了。38例女性受检者中9例有DMD/BMD家族史,29例有DMD/BMD患儿生育史。其中29例有生育史的女性受检者中,20例检出携带,9例未检出携带(4例受检者所生患儿亦未检出缺失或重复突变);9例有家族史的女性受检者中,7例检出携带(2例为重复突变携带),2例未检出携带。25例进行开放式肌肉活检的患者中,14例患者的病理组织学染色结果显示符合进行性肌营养不良病理改变,其余部分患者病理改变符合血肿改变,部分患者符合多发性肌炎病理改变。14例符合进行性肌营养不良病理改变的患者进一步进行免疫组织化学染色,结果显示:11例(3例检出dystrophin基因突变,8例未检出dystrophin基因突变)患者可见肌纤维膜dystrophin蛋白表达完全缺失,3例(未检出dystrophin基因突变)患者肌纤维膜dystrophin蛋白不同程度表达减弱。结论:MLPA技术可以快速而准确的检测出DMD基因79个外显子中单个或多个外显子的缺失或重复情况,以及女性携带者,但仍会有约30%的突变不能被检测出来,而免疫组化实验则能够检测出dystrophin蛋白在骨骼肌中的表达情况,因此,将MLPA技术与肌肉活检和免疫组化染色相结合,对DMD/BMD的补充筛查和鉴别诊断有重要意义,为患者的诊治和预后提供依据。