基于比色荧光纳米球的新冠病毒N蛋白侧向层析检测

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新型冠状病毒是继SARS病毒之后的第七种冠状病毒,自其爆发后,便引起了大量民众的恐慌。截止2022年4月21日,全球已有超过5亿人感染新冠病毒,死亡人数达到620多万。新型冠状病毒是致病性高,传染性极强的一类β型冠状病毒,它与2003年爆发的SARS病毒的基因序列相似度可达到80%。目前报道了多种检测该病毒的方法,它们都有各自优点,但仍无法完全满足当前复杂的疫情局面。本论文结合侧向层析即时检测新冠病毒优点,同时在当前侧向层析基础上进一步改进,做了以下工作。首先制备了一种兼具比色和荧光性质的多功能纳米球。在带有羧基的量子点荧光球表面组装一层带正电荷聚乙烯亚胺,利用静电作用吸附纳米金颗粒。然后利用硅烷化试剂在吸附了纳米金的荧光球表面包覆一层硅壳,即制备得到比色荧光纳米球。这种多功能纳米球性质稳定,抗光漂能力强,具有比色和荧光双重检测功能,还兼具信号放大功能,能够很好的用于抗体标记和检测,这是该方法最大的创新点。然后制备了样本的检测平台-试纸条。试纸条作为液体样本检测的载体,具有简便快捷成本低的优点。采用CN140型号的硝酸纤维素膜(即NC膜),这种型号的NC膜流速较快,能够在保证信号出现的情况下背景吸附少,在侧向层析过程中能够稳定检测出信号。建立了基于试纸条的新冠病毒N蛋白侧向层析检测方法。优化了封闭剂浓度,比色荧光纳米球浓度和层析时间。考察了该方法的特异性,抗干扰能力,稳定性,确定了其线性工作范围为8.9-180.0 nmol/L,检测限为2.1 nmol/L(1.3μg/m L)。这种方法所用的试剂简单易得,操作简单,不受环境和人员技术能力的限制。方法特异性好,抗干扰能力强,稳定性佳(组内变异系数为4.7%,组间变异系数为7.5%),在25分钟内目视就能得到检测结果,大大提高了检测效率。
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