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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus2, PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等相关疾病的主要病原。PMWS发病猪多为断奶仔猪和育肥猪,表现为精神沉郁、呼吸急促、厌食、黄疸、贫血、进行性消瘦或生长迟缓等。随着国际贸易交流的广泛开展,PCV2在全球呈现出流行趋势,给养猪业造成了巨大的影响,也给社会带来了巨大的经济损失,一种快速、准确的诊断方法对疾病的防控显得十分重要。本研究制备了PCV2单克隆抗体,建立了捕获ELISA抗体检测方法,并与间接ELISA方法进行了临床应用比较研究。PCV2单克隆抗体的制备：PCV2的ORF2基因编码病毒的结构蛋白(Cap),也是区分PCV1与PCV2的重要区域,其编码蛋白(Cap)具有良好的免疫原性。本实验以Cap蛋白为抗原免疫6-8周龄的雌性Balb/C小鼠,将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选与亚克隆后共得到5株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D3、3E10、1C5、3H11、4F9。将杂交瘤细胞对Balb/C小鼠进行腹腔注射,收集腹水并用间接ELISA方法检测腹水的抗体效价滴度,分别为1：51200、1：51200、1：25600、1：25600、1：25600,并用辛酸-饱和硫酸铵方法进行纯化。用Western Blot检测2D3、3E10两株单抗,结果显示两株单抗均可以与Cap蛋白发生特异性结合。PCV2捕获ELISA方法的建立：将纯化得到的高纯度单克隆抗体包被在96孔酶标板上,0.5%BSA封闭后加入Cap蛋白,Cap蛋白与包被的抗体发生特异性反应也结合在酶标板上,用于检测血清中的PCV2抗体。优化反应条件,包被抗体的最佳稀释度为1：3200,与之结合的Cap蛋白最佳稀释度为1：2000,即浓度为3.52μg/mL,被检血清最佳稀释度为1：40,鼠抗猪酶标二抗最佳稀释度为1：1600。建立的捕获ELISA方法的临界值为0.2,即血清样品OD630nm值大于0.2时,判为阳性；血清样品OD630nm值小于0.2时,判为阴性。并对建立的捕获ELISA方法进行敏感性、特异性和重复性研究,确定建立的捕获ELISA抗体检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性。PCV2捕获ELISA检测方法的临床应用：本实验用建立的捕获ELISA方法与武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒同时检测了近20个不同地区(公司)的1928份血清样品。捕获ELISA方法的阳性检出率为62.97%(1214／1928),间接ELISA方法的阳性检出率为72.67%(1401／1928),用两种方法检测的结果相一致的有1589(1164阳性、425阴性)份,符合率为82.42%。通过特异性试验比较分析,建立的捕获ELISA方法比间接ELISA方法具有更好的特异性。结果表明,本研究建立的捕获ELISA抗体检测方法能有效检测PCV2抗体,为进一步开发猪圆环病毒2型捕获ELISA抗体检测试剂盒奠定了基础,也为断奶仔猪多系统衰竭综合征的防控提供一种有效的检测方法。