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目的1. Klotho在肝癌与癌旁组织中的表达差异，Klotho的表达与肝癌病人临床病理资料的关系。2. Klohtho的高或低表达对肝癌细胞生长的影响,及klotho基因通过Wnt1/β-catenin信号通路对肝癌细胞生长调控的分子机制探讨。3.肝癌组与对照组病人血清中分泌型klotho蛋白浓度差异的研究。方法1.采用免疫组织化学EnVision二步法,检测klotho蛋白在52例肝癌与54例癌旁组织芯片中的表达情况,并结合相应的临床病理与生存期资料进行统计分析。2.建立klotho基因高表达载体和klotho特异性的RNAi，转染HA标签的klotho高表达载体pCMV6-Entry-KL和对照空载体pcDNA6-Entry入肝癌细胞；转染klotho基因特异性的siRNA及对照siRNA入肝癌细胞，Western blot检测klotho蛋白表达水平,使用MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡等对细胞生长进行评价。Western blot检测Wnt1/β-catenin信号通路关键分子的表达，并使用免疫荧光技术检测β-catenin分子胞内表达及分布的情况。3.对HepG2细胞株给予不同浓度的klotho蛋白（0.25ug/ml、0.50ug/ml、0.75ug/ml、1.00ug/ml与1.25ug/ml）处理后，观察HepG2细胞增殖的影响。4.使用ELISA法检测20例肝癌病人与29例对照组病人血清中分泌型klotho蛋白的浓度，并结合相应的临床病理与生存期资料进行统计分析。结果1.肝癌组织中klotho蛋白表达阳性率(61.5%)低于癌旁组织(100.0%)(P <0.05)。肝癌组织中klotho蛋白的表达与肝癌的临床分期与病理分级呈负相关（P<0.05）,与患者性别、年龄、肿瘤大小、是否有肝硬化等的相关性无统计学意义(P>0.05)。Klotho表达阳性的肝癌病人（n=32）生存期高于表达阴性的病人（n=20）（P <0.05）。2.肝癌细胞株HepG1，HepG2中klotho蛋白的表达低于正常肝细胞株LO2中的表达。HepG2细胞转染klotho高表达载体pCMV6-Entry-KL后，细胞增殖明显受到抑制，并且凋亡率增加。而HepG2细胞转染klotho siRNA后，细胞的增殖明显增加，并且凋亡率降低。3. HepG2细胞转染klotho高表达载体pCMV6-Entry-KL后，Wnt1/β-catenin信号通路中的关键信号分析β-catenin、c-myc与cyclinD1表达下降，免疫荧光显示细胞浆内的β-catenin降低，向细胞核内异位的β-catenin降低。HepG2细胞转染klotho siRNA后，Wnt1/β-catenin信号通路中的关键信号分子β-catenin、c-myc与cyclinD1表达增加。4.对HepG2细胞给予不同浓度的klohto蛋白处理后，HepG2细胞的增殖受到明显抑制，其中对HepG2细胞抑制作用最大klotho浓度为1.25ug/ml。5.肝癌组（n=20）中分泌型klotho蛋白的浓度（291.60±30.57pg/ml）高于对照组（n=29）中的浓度（186.06±14.28pg/ml）(P <0.05)。通过ROC分析分泌型klotho蛋白的临界值为227.90pg/ml（sensitivity=71.4%%，specificity=72.4%）。分泌型klotho蛋白的浓度大于等于227.90pg/ml肝癌患者生存期明显高于低于205.27pg/ml的肝癌患者(P <0.05)。结论Klotho基因可以通过Wnt1/β-catenin信号通路调控肝癌细胞生长，分泌型klotho蛋白可以作为潜在的肝癌肿瘤标志物之一。