论文部分内容阅读
头孢喹肟（cefquinome,CEF）是动物专用的第一个第四代头孢菌素,具有抗菌谱广、抗菌活性强,吸收迅速,安全,高效等特点,临床上取得了良好的效果,在我国兽医临床上具有广阔的应用前景。本课题研究了硫酸头孢喹肟的含量测定及其在猪体内的药动学与残留,具体研究内容如下:1 HPLC法测定硫酸头孢喹肟含量建立了测定硫酸头孢喹肟含量的高效液相色谱法。采用C18色谱柱（4.6 mm×150mm,5μm）,称取一水合高氯酸钠3.45 g溶于1000 mL水中,加磷酸12 mL,用三乙胺调至pH 3.6,将此溶液与乙腈按90:10的比例混合作为流动相,流速为O.8 mL·min-1,紫外检测波长为270 nm,进样量20μL,柱温30℃。头孢喹肟浓度在0.06 mg·mL-1-0.14 mg·mL-1时,其峰面积与浓度的线性关系良好,线性方程为A=42382 C-162477（r=0.9999）,检测限为0.005μg·mL-1;日内、日间精密度变异系数分别为0.43%、0.53%;重复性变异系数为0.93%,供试品在流动相中稳定性良好,8小时内变异系数为0.86%。结果表明,本方法操作简便,分析快速,结果准确,适用于硫酸头孢喹肟原料药的含量测定。测得2.5%硫酸头孢喹肟注射液的含量为标识量的99.3%,符合进口兽药质量标准。2硫酸头孢喹肟中四种有机溶剂残留量的测定建立了气相色谱测定硫酸头孢喹肟中乙醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯等4种有机溶剂残留的方法。采用DB-624石英毛细管柱,FID检测器,程序升温:40℃（保持10 min）-220℃（保持5 min）,升温速率为30℃·min-1,进样口温度为220℃,检测器温度为230℃,流速:5 mL·min-1,分流比为20:1。结果显示:硫酸头孢喹肟原料药中乙醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯在所考察的浓度范围内与峰面积比值呈良好的线性关系（r=0.9994-0.9998）,检测限分别为1.67μg·mL-1,1.89μg·mL-1,2.56μg·mL-1,2.02μg·mL-1（S/N=5）,平均加样回收率97.69%-99.42%,RSD均小于5%（n=3）。本试验建立的色谱方法简便、灵敏、准确、重现性好,适用于硫酸头孢喹肟中有机溶剂残留量的测定,测得硫酸头孢喹肟原料药中有机溶剂均未超标,符合标准。3硫酸头孢喹肟在猪体内的药动学初步研究建立了猪血浆中头孢喹肟的SPE-HPLC测定方法,对头孢喹肟在猪体内的药动学特征进行初步研究。选用健康猪6头,进行单次肌肉注射推荐治疗剂量(2mg·kg-1)的自制2.5%硫酸头孢喹肟注射液。血浆药物提取后经SPE柱净化,净化液进行HPLC分析。色谱条件为C18反相柱,流动相采用高氯酸钠-磷酸-三乙胺缓冲液（pH 3.6）:乙腈（V:V,90:10）。药-时数据用3P97药动软件进行分析。结果表明,头孢喹肟在0.05-25μg.·mL-1内线性范围良好,r=0.9993,最低检测限为0.05μg·mL-1。头孢喹诺高、中、低(25、5、0.5μg·mL-1)3种浓度的血浆样品,平均回收率分别为（90.67±0.84）%,（94.06±1.26）%,（91.64±2.03）%,其日内变异系数分别为0.94%、0.63%、1.96%,日间变异系数为O.48%、1.28%、2.22%。药动学数据分析显示:头孢喹肟的药时数据适合一级吸收二室模型,主要药动学参数为T1/2α:（0.67±0.11）h,T1/2β:（2.28±0.49）h,T1/2Ka:（0.40±0.12）h,CL/F（s）:（0.27±0.03）L·kg-1·h,V/F（c）:（0.40±0.10）μg·mL-1,Tmax:（0.80±0.05）h,Cmax:（2.44±0.24）μg·mL-1,AUC:（7.28±1.11）μg·mL-1·h。结果提示,健康猪单次肌注硫酸头孢喹肟后吸收迅速,持效时间较长,临床用药18 h后仍能维持对常见病原菌的有效血药浓度,建议用药方案:2mg·kg-1,1日1次。此方法可靠、快速、灵敏度高,该法的建立可为今后同类药物的研究提供基础。4硫酸头孢喹肟在猪体内的残留初步研究建立了头孢喹肟在仔猪组织内残留的高效液相色谱分析法。以2 mg·kg-1的剂量于股四头肌肌肉注射2.5%硫酸头孢喹肟注射液,连续用药五天,于最后一次给药后不同时间点采样,取肌肉、肝脏、肾脏、肺脏、脂肪加皮肤等组织。样品经匀浆、提取后转入SPE柱净化,浓缩后进HPLC进行色谱分析。本试验条件下,各组织浓度在20μg·kg-1-500μg·kg-1范围内时,线性关系良好,最低定量限为20μg·kg-1。将头孢喹肟以20、100、500μg·kg-1分别添加到空白组织中,测得肌肉、肝脏、肾脏、肺脏、脂肪+皮肤组织中头孢喹肟回收率均在78%以上,平均回收率分别为81.57%、82.42%、81.29%、83.97%、78.80%.日内变异RSD%在1.82-6.25%之间,日间变异RSD%在1.11-6.35%之间。残留消除研究结果显示:停药后各组织中头孢喹肟浓度逐渐下降,最后一次注射后的第4天,肺脏、脂肪+皮肤中已经检测不到头孢喹肟,最后一次注射后的第5天,所有组织均检测不到头孢喹肟。根据欧盟标准及试验结果,猪肌肉注射硫酸头孢喹肟注射液(2 mg·kg-1,1日1次,连续5天)后,建议休药期为3天。