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肝癌是一种发病隐蔽,病情恶化快的恶性肿瘤,是严重危害生命健康的疾病。在我国发病率较高,特别是进入90年代以来,原发性肝癌已上升为我国第二位癌症杀手,每年死亡人数在10万以上。因此,深入研究肝癌的发病机理,加紧其基础研究工作十分必要和急迫。 建立cDNA文库并利用抗体从中筛选出目的基因是一种十分有效的寻找未知基因的手段。自80年代发明此方法以来已有数百种目的基因被克隆出来。目前,我室已先后研制、筛选出10余株特异性好的鼠抗人肝癌单克隆抗体,其中一株单抗的放免显像剂已用于临床、放免治疗剂也进入临床验证阶段。故利用这一单抗资源,寻找其相应抗原基因,对肝癌发病机理的研究应很有意义。鉴于此,本研究以肝癌细胞株作为建库材料来源,以λgt11噬菌体为载体,构建了人肝癌细胞cDNA表达文库。利用三株肝癌单抗为探针对所建文库进行筛选,并对筛出的阳性克隆进行了序列测定和分析。具体实验方法及结果如下: 1.利用Western免疫印迹,过碘酸钠氧化糖基实验验证3株肝癌单抗A10,E5,F11与变性抗原的结合能力,了解其相应抗原的性质。结果发现:3株肝癌单抗的Western免疫印迹结果均为阳性。其中mAb