论文部分内容阅读
目的:脂肝泰胶囊(由生黄芪、炒白术、茵陈蒿、郁金、柴胡、橘红、泽泻、丹参、大黄、生山楂、枳实、制首乌等药物组成)具有健脾疏肝,消痰化瘀的功效,为导师杨牧祥教授经多年临床观察筛选的效方,对高脂血症性脂肪肝具有显著的治疗效果,为总结判定其疗效,进行了严密设计的随机对照(双盲)临床研究。为了进一步探讨其作用机制,采用高脂饲料复制了高脂血症性脂肪肝动物模型,同时施加药物干预,通过观察其对胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的影响,探讨了本方在调节脂质代谢和保护肝功能方面的作用机制;通过观察其对丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的影响,探讨了其抗脂质过氧化损伤的作用机制;通过观察其对一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素F1α(6-Keto-PGF1α)的影响,探讨了该方对血管舒缩状态和血液运行等方面的作用机制;通过观察其对细胞凋亡及相关调控基因bcl-2和bax蛋白的影响,探讨了其抗细胞凋亡的作用机制。并运用HE染色方法观察了本方对肝组织病理形态学的影响。方法: 第一部分 脂肝泰胶囊治疗高脂血症性脂肪肝的临床观察本研究采取多中心临床试验,联合三家医院,采取严密设计的随机对照(双盲)研究方法,以东宝肝泰为对照药,严格按照诊断标准和纳入标准选择治疗组和对照组各60例患者,经用药治疗1个疗程(2个月)后,观察比较了患者在治疗前后临床症状、血脂、肝脏B型超声影象学、肝功能、血液流变学等方面的变化。第二部分 脂肝泰胶囊治疗高脂血症性脂肪肝作用机制的实验研<WP=6>究实验一 脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠脂质代谢和病理形态学的影响 健康雄性SD大鼠60只,随机分为5组。即(1)正常对照组(简称正常组):灌服生理盐水;(2)模型对照组(简称模型组):灌服生理盐水;(3)脂肝泰低剂量组(简称低剂量组):每日用药剂量为0.7g/kg;(4)脂肝泰高剂量组(简称高剂量组):每日用药剂量为1.4g/kg;(5)东宝肝泰对照组(简称对照组):每日用药剂量为0.9g/kg。各组1次/d灌胃,每次用药体积均按1ml/100g计算。除正常组喂饲普通饲料外,其余各组均喂饲高脂饲料。同时,各治疗组灌服对照药或治疗药,正常组、模型组灌服等量生理盐水。连续灌胃10周,确定脂肪肝形成后,于最后一次给药禁食12h后断头取血,将血样低温离心,分离血清,采用酶法测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA的含量;采用赖氏法测定血清AST、ALT的含量。同时迅速剖取动物肝脏,在肝脏最大叶距边缘0.5cm处取1 cm×1cm大小肝组织,甲醛固定,常规石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察肝组织的形态结构。另取部分肝组织(1.0~1.5g),制成10%的肝组织匀浆,4℃4000r/min离心10min,提取上清液,用722型光栅分光光度计采用酶法测定TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA含量。实验二 脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠血清和肝组织MDA含量和SOD、CAT、GSH、GSH-PX活性的影响实验动物分组、用药情况同前。连续灌胃10周,确定脂肪肝形成后,于最后一次给药禁食12h后断头取血,将血样低温离心,分离血清,MDA测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色分析法 ,SOD活力测定采用黄嘌呤氧化酶法,CAT测定采用可见光法,GSH、GSH-PΧ测定采用比色定量分析法,严格按试剂盒说明书操作测定各项指标含量。 实验三 脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠NO、ET-1及TXB2、6-Keto-PGF1α含量的影响实验动物分组、用药情况同前。连续灌胃10周,确定脂肪肝形成后,于最后一次给药禁食12h后断头取血,先取血1ml加入一洁净试管内,再取血2ml加入预先用抑肽酶抗凝的试管内,迅速将血样4℃低<WP=7>温4000r/min离心10min,分离血清、血浆。同时迅速剖取动物肝脏,取部分肝组织制成10%的肝组织匀浆,4℃4000r/min离心10min,提取上清液。NO采用硝酸还原酶法,ET-1、 TXB2和6-Keto-PGF1α均采用放射免疫法测定。实验四 脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠肝脏细胞增殖与凋亡及相关调控基因表达的影响 实验动物分组、用药情况同前。自实验正式开始后,连续灌胃10周,确定脂肪肝形成后,于最后一次给药禁食12h后处死动物,取少许肝组织,剪碎至1mm3大小,然后置于100目铜网上轻搓,边搓边以生理盐水冲洗,直至将组织搓完。收集细胞悬液,离心2分钟,弃去上清,去除细胞碎片,70%乙醇固定,运用流式细胞仪检测实验大鼠肝细胞增殖与凋亡及相关调控基因bcl-2、bax表达的影响。 所有数据均采用SPSS10.0软件进行统计分析。 结果: 第一部分 脂肝泰胶囊治疗高脂血症性脂肪肝的临床观察 1 临床症状变化 患者临床症状主要表现为乏力74例(67.9%)、肝区不适63例(57.8%)、肝区疼痛23例(21.1%)、腹胀61例(55.9%)、食少30例(27.5%)。脂肝泰胶囊对改善乏力、肝区不适、肝区疼痛、腹胀、食少的有效率分别为94.7%、88.9%、91.7%、9