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目的: 心肌细胞凋亡是心血管疾病发生和发展的重要原因,胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factors1,IGF-1)可以保护心肌细胞免于凋亡。在我们的前期工作中,利用基因芯片技术,筛选出受IGF-1调控下调、而未见报道与心肌细胞凋亡相关的基因----基本转录元件结合蛋白(Basic transcription element bindingprotein,BTEB)。BTEB是一个转录因子,主要调控能量代谢相关基因细胞色素c家族成员的基因表达,因而我们推测,线粒体与氧化应激机制可能参与了心肌细胞凋亡的过程。本实验旨在观察IGF-1通过下调BTEB表达对乳鼠心肌细胞线粒体功能的保护作用,从而为明确IGF-1保护心肌细胞免于凋亡的精确机制打下基础。 方法: 体外培养乳鼠原代心肌细胞,血清饥饿和过氧化氢(200μM)诱导凋亡,并用IGF-1(10 nM)刺激处理,通过Annexin V-FITC/PI双染色法、半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)酶活性检测,观察IGF-1对心肌细胞凋亡的影响。并进一步利用siRNA技术下调BTEB基因表达,用JC-1线粒体膜电位检测法、透射电镜观察被诱导凋亡的心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,用DNA-Ladder、AnnexinV-FITC/PI双染色法、Hoechst33258、Caspase-3等检测方法观察心肌细胞凋亡的改善情况。 结果: 血清饥饿和过氧化氢可诱导体外培养的乳鼠心肌细胞凋亡,IGF-1能够明显改善心肌细胞凋亡的情况;siRNA人为下调BTEB48 h后,心肌细胞线粒体膜电位明显下降率下降(P<0.01),线粒体形态明显改善,DNA片段化改善,凋亡小体明显较少,Caspase-3酶活性降低(P<0.01),细胞凋亡率明显下降(P<0.01),与IGF-1抗心肌细胞凋亡效应相似。 结论: IGF-1通过下调BTEB表达改善心肌线粒体的功能,BTEB是IGF-1保护心肌细胞免于凋亡的关键环节。IGF-1可能通过下调BTEB的表达改善线粒体功能保护心肌细胞免于凋亡。