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红树林湿地生态系统大多位于热带亚热带海陆交界处,各种环境因子作用剧烈,环境条件复杂多变,其中分布着极其丰富的微生物资源。红树林中微生物不仅可以将废水中的重金属离子吸附固定,利用营养物质达到净化废水的目的。还可以把有机污染物作为碳源进行降解,从而避免这些污染物进一步扩散。 本文采用PCR-DGGE技术对淇澳岛红树林湿地区域不同生境中沉积物的微生物群落构成进行了研究。对沉积物样品中细菌16SrDNAV3区特征片段进行PCR-DGGE垂直梯度凝胶电泳和水平梯度凝胶电泳,条带切胶回收,克隆测序,对获得的DNA序列进行BLAST比对和系统进化分析,并且使用Quantity One软件对所得图谱进行分析,确定了最适合的PCR方式和条件,变性剂浓度范围40%-60%,DGGE电泳的电压为80V,电泳时间为15h。实验结果表明9个不同站点的沉积物中微生物的群落构成均有差异,相同条带在不同泳道中均有出现,且在不同泳道中信号强度不同。该区域沉积物中优势菌群主要是未培养的拟杆菌门(Bacteroidetes)细菌克隆、未培养的硝化螺旋菌门(Nitrospirae)细菌克隆、未培养的变形菌门(Proteobacteria)细菌克隆以及其它一些尚未归类的分离子各种环境样品中的细菌克隆。微生物群落多样性介于2.47和3.07之间,物种多样性高,优势种群明显。 本文对该区域沉积物以芘作为唯一碳源进行富集培养后,采用平板划线分离纯化,并对分离出得纯菌株进行鉴定。从淇澳岛红树林地区沉积物样品中筛选出能够降解芘的微生物3株,编号分别为B1、B2和B3,并初步研究环境因子对其生长的影响。实验结果表明,B1为革兰氏阴性菌;B2为革兰氏阳性菌,在pH5-9范围内均能生长,在pH为6生长最好,最适盐度为2.5‰,不同芘浓度B2具有较好的耐受性,添加葡萄糖和邻苯二酚两种共代谢产物都会促进B2的生长;B3为革兰氏阴性菌,其生长趋势优于B2,能够在多种pH下生长,在盐度低于20‰时能够较好生长,对于不同芘浓度,随着浓度增加生长明显下降,添加不同共代谢底物也能很好的促进生长。通过对菌株B1、B2和B3的16SrDNA测序和BLAST比对得出,B1属于鞘脂单胞菌属(Sphingopyxis sp.),B2属于微杆菌属(Microbacterium sp.),B3属于铜绿假单胞菌属(Pseudomonas sp.),相似性均达到98%以上。对所筛选出的芘降解菌株进行Biolog微生物鉴定,结果与分子生物学方法鉴定一致。通过以上实验了解降解菌的生长特性是有效利用其进行原位修复的必要理论基础。