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目的：目前在临床治疗急性淋巴细胞白血病（急性B淋巴细胞白血病细胞、急性T淋巴细胞白血病细胞）化疗方案中使用的MTX制剂中存在着单体以及L和D型两种构型不同比例混合现象，D-（-）MTX一直被当成无意义的污染物而被忽视,没有考虑到该药的手性选择性差异的问题。本实验就是比较体外导向不同浓度梯度的氨甲喋呤对映体单体(L-(+)MTX、 D-(-)MTX）及其及其不同比例对映体混合体[(±)MTX]对急性淋巴细胞白血病细胞（BALL-1、CCRF-CEM）的抑制及诱导凋亡的差异。方法：体外导向药物L-MTX、D-MTX及其混合型（D:L=1:9-9:1)作用于淋系白血病细胞,用台盼蓝染色计算药物作用后的死细胞率并在倒置显微镜下观察药物作用下的细胞形态变化；EB-AO双重荧光染色在荧光显微镜下药物作用下的观察细胞染色情况；应用MTT比色法分析其对细胞的抑制率绘制抑制曲线图并计算IC50值,比较不同MTX对映体（L-MTX/D-MTX）及其混合型对增殖淋系白血病细胞的增殖的抑制作用；碘化丙啶(P I)单染流式细胞术检测药物作用后的细胞周期以及凋亡峰变化情况,比较不同MTX对映体（L-MTX/D-MTX）及其混合型对增殖淋系白血病细胞的DNA合成的抑制作用;DNA Ladder测药物作用后的细胞凋亡情况。结果：①L-(+)MTX、D-(-)MTX及混合型能以时间和剂量依赖方式抑制BALL-1细胞和CCRF-CEM细胞的增殖,且得出L-(+)MTX和D-(-)MTX对BALL-1、CCRF-CEM细胞的增殖抑制作用具有化学结构的立体选择性，抑制强度依次为L-(+)MTX>D-(-)MTX，但却低于(±)MTX（D：L=1:9、D：L=2:8），但(±)MTX在D:L=3:7-1：9范围内抑制强度低于L-(+)MTX，高于D-(-)MTX；同时可以发现同种药物作用下对BALL-1的杀伤力高于CCRF-CEM；同时得出L-（+）MTX-CCRF-CEM/BALL-1、D-（-）MTX-CCRF-CEM/BALL-1的24h-IC50值（umol/L)分别为143.36±1.96,80.02±2.24，169.67±2.72，103.78±2.10，48h-IC50值（umol/L)分别为20.76±1.16，58.17±1.98，34.13±1.24，96.78±2.05，72h-IC50值（umol/L)分别为2.21±0.31，11.28±1.40，4.05±0.74，19.57±1.62，且差异有统计学意义（P<0.05)。②L-(+)MTX、D-(-)MTX及混合型(1μmol.L-1)能诱导BALL-1细胞和CCRF-CEM细胞发生坏死、凋亡,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度组，不同时间作用下，出现细胞体积变小、核固缩、核染色质浓集等不同程度的形态学改变,并且通过DNA Ladder测细胞凋亡发现D-(-)MTX凋亡梯度弱于L-(+)MTX及混合型(D:L=1:9，1μmol.L-1)且BALL-1药物作用后的凋亡梯度强于CCRF-CEM;(3)体外导向药物L-(+)MTX、D-(-)MTX及其混合型对BALL-1细胞和CCRF-CEM细胞对细胞周期产生抑制作用。表明氨甲喋呤单一体及其不同比例对映体对BALL-1和CCRF-CEM细胞的增殖和DNA合成有抑制作用，两种细胞的细胞周期均发生G0/G1期所占比例下降，S期所占比例上升，G2/M期的比率明显下降。结论：1.L-(+)MTX的抗BALL-1和CCRF-CEM细胞增殖作用明显强于D-(-)MTX，弱于MTX对映体混合体（1:9-2:8），后者具有协同作用，且BALL-1对药物的耐受力强于CCRF-CEM。2.除了细胞毒性作用外，MTX对映体及其混合体可能是通过细胞周期的改变影响对CCRF-CEM和BALL-1有杀伤作用并引起细胞凋亡的。