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背景:自体脂肪移植的应用已经有一百余年历史,因其取材方便、无排斥反应、安全有效等优点而被接受,应用领域广泛,一直都是众多学者的研究的热点。脂肪作为一种优质填充剂,目前临床应用中最大的困难是移植后受区的高吸收率。患者需要承受多次痛苦和再次高消费,医生也也增加了医疗风险。目前来说,“一次抽脂,多次注射”是改善其高吸收率的良好方法。以往有众多学者报道了脂肪冷冻的相关文章,通过实验发现冷冻后脂肪仍具有较高的细胞活性,能够达到移植要求。关于冻存保护剂的研究一直很多,二甲基亚砜通过众多研究被认为是有效的冻存保护剂,但其具有的生物毒性使其临床应用价值几乎为零。本实验选用了海藻糖作为冻存保护剂,它是一种能稳定生物膜和蛋白质结构的非渗透性保护剂;减少氧化应激对生物体的损伤;具有对生物抗脱水、抗高渗、抗冷冻保护作用;有对生物制品的干燥与保存作用;在冷冻及复苏时能使渗透压造成的细胞损伤大大降低。重要的是目前海藻糖未发现明显细胞毒性,海藻糖临床上已用于器官保存液及滴眼液。而脂肪干细胞作为脂肪移植中的目前最大的热点,其提高移植脂肪成活率的结论得到了诸多学者研究的支持。干细胞是存在于体内多种组织中有多向分化潜能的、自我更新的多能干细胞。因为具备容易分离扩增、多向分化和低免疫原性等特征,而成为了目前组织工程和再生医学中的种子细胞。本文首次将干细胞与冷冻后脂肪联合移植,以观察对冻存后脂肪移植后的存活率是否有所提高,以期“一次吸脂,多次移植”的达成。目的:本研究将冻存后的人颗粒脂肪组织与干细胞混合后移植到裸鼠背部皮下,观察移植物的组织结构、重量、血管数等指标,探索人脂肪干细胞是否有助于冷冻后脂肪细胞的存活。方法:抽取11例成年女性腹部或大腿脂肪并分离提纯,每人得20ml纯化脂肪。取10ml脂肪提取脂肪干细胞并培养至第三代,取10ml脂肪与0.35mmol/L的海藻糖等体积混合后冷冻保存于液氮中12周。将冷冻后脂肪与第三代人脂肪干细胞以500mg:6*10~5混合后作为移植实验组,将单纯冷冻后脂肪作为移植对照组。取20只裸鼠,将脂肪移植于裸鼠背部两侧,左侧为实验组,右侧为对照组。4周、12周后,分别取出移植物,通过移植物大体观、检测移植物重量、HE染色、油红O染色、免疫组化分析及血管数量等方法分析脂肪干细胞对冻存后脂肪移植存活率的影响。结果:细胞实验:1、脂肪细胞提取培养后1天即可观察到有少量多角形细胞贴壁,之后这些细胞逐渐转变为梭形细胞。达到90%融合后可观察到长梭形细胞呈类同心圆有序排列。2、脂肪干细胞流式细胞术检测结果:CD29、CD44、CD90为高表达,而CD34、CD45低表达。符合间充质干细胞特点。动物实验:3、移植脂肪重量检测结果:实验组4周、对照组4周、实验组12周、对照组12周移植物平均重量分别为(338.78±30.15)mg、(247.66±27.59)mg、(318.22±17.19)mg、(195.06±10.30)mg。实验组与对照组间结果均有统计学意义(P<0.05),实验组4周与实验组12周结果无统计学意义(P>0.05)。4、检测移植脂肪的微血管数量:实验组4周、对照组4周、实验组12周、对照组12周结果分别为53.12±2.42、37.50±1.60、49.75±1.03、29.63±1.99。实验组与对照组间结果均有统计学意义(P<0.05),实验组4周与实验组12周结果无统计学意义(P>0.05)。结论:添加了脂肪干细胞的冷冻后的脂肪组织移植成活率比单纯冷冻脂肪组织高。