镉富集型野菜筛选和耐镉限速酶基因OAS-TL、γ-GCS的克隆

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:jvict
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本研究选取比较常见的15种菜用野菜为供试材料,在单一重金属镉污染的土壤上胁迫栽培,然后检测分析其体内重金属镉的含量和还原性谷胱甘肽含量变化,初步筛选出镉高、中和低的野菜品种和符合植物体内含镉量低于国家标准的安全食用品种;并且以初步筛选的高累积型的野菜品种为试验材料,克隆与植物重金属抗/耐性相关的谷胱甘肽生化代谢途径中限速酶基因OAS-TL和γ-GCS基因;同时以OAS-TL6基因序列为模板,设计荧光定量引物,采用荧光定量技术,分析在不同时间和镉污染同一水平的条件下,探讨分析OAS-TL6基因在植物对重金属镉的抗/耐性上植物地上部分和地下部分的转录水平。研究的主要结论如下:(1)野菜对土壤中的重金属镉都有一定的吸收量,且不同野菜品种地上部分和地下部分镉含量累积量存在差异,同一品种野菜中镉累积的主要部分在地下部分即根部;相较与我国现用的蔬菜体内含镉限量标准而言,在含有50μmol/L的Cd2+离子土壤中种植15种野菜,发现野菜的可食部分均超过国家标准值;(2)对于研究抗性/耐性形成的相关生化代谢途径之一的谷胱甘肽代谢途径中的两个限速酶OAS-TL基因和γ-GCS基因的克隆试验,共克隆到目的基因3个片段,为"OAS-TL6" (1139bp)、"OAS-TL4" (1001bp)、"γ-GCS" (783bp),分别可以编码285个氨基酸、231个氨基酸,186个氨基酸。同时,通过DNAMAN等软件比较分析羽衣甘蓝的三个基因序列与印度芥菜、甘蓝型油菜、小白菜、芜菁等十字花科类的植物的同源性达到95%以上;(3)荧光定量分析表明在有重金属Cd污染的土壤上种植羽衣甘蓝会对植物体内OAS-TL6基因的转录表达都会增加,可以初步在推测植物羽衣甘蓝在受镉胁迫使的地下部分的OAS-TL转录水平会持续一段时间高于地上部分,且随着胁迫时间的增加,转录表达量有下降趋势的规律。
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