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牛奶被誉为自然界营养最为均衡的全价食品,在人类饮食结构中有不可替代的作用和地位,生鲜乳处于乳制品供应链的最上游,是目前限制我国乳业持续健康发展的主要因素。因此,本研究采集甘肃地区牛场生鲜乳样品,对其菌落总数、芽孢数和有害细菌进行研究,主要研究结果如下:1.通过标准平板计数法对甘肃地区21个牛场(规模养殖、散户养殖和小区养殖)采集的175份生鲜乳样品的微生物菌落总数和芽孢数进行测定,结果表明,甘肃地区生鲜乳微生物菌落总数平均数和芽孢数平均数分别为14975cfu/m L和32个/m L,菌落总数满足我国生鲜乳收购标准,绝大多数芽孢数达到我国UHT奶生鲜乳收购标准;散户养殖生鲜乳微生物菌落总数和芽孢数相对规模养殖和小区养殖较多,且夏、冬季生鲜乳微生物菌落总数和芽孢数差异明显。2.通过传统分离培养鉴定方法从甘肃地区夏、冬季生鲜乳中共分离得到细菌105株,鉴定为12属,芽孢杆菌属(Bacillus)和葡萄球菌属(Staphylococcus)是分离得到的主要有害菌,不同牛场、季节分离的菌株均有差异;夏季分离得到的优势菌是芽孢杆菌属和葡萄球菌属,冬季以芽孢杆菌属为主,且相对来说散户养殖生鲜乳细菌种类更加多样化;分离得到的致病菌有金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、棒状杆菌(Corynebacterium)、不动杆菌(Acinetobacter)、微杆菌(Microbacterium)、金黄杆菌(Chryseobacterium)、大肠杆菌(Escherichia coli)和枸橼酸杆菌(Citrobacter);腐败菌有芽孢杆菌、异常球菌(Deinococcus)假单胞菌(Pseudomonas)和考克氏菌(Kocuria)。3.通过K-B纸片法对金黄色葡萄球菌进行耐药性测定,结果表明,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)除对头孢氨苄敏感外,对大部分抗生素表现出耐药性且有多重耐药发生。金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素、复方磺胺耐药率较高,依次为80%、75%和75%,对氨苄西林、四环素和庆大霉素也表现出不同程度的耐药性,对阿莫西林、环丙沙星和氯霉素有轻度耐药;多重耐药性主要表现在以耐复方磺胺、四环素、青霉素和氨苄西林为主。4.通过特异性PCR检测发现,芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和不动杆菌是甘肃地区生鲜乳中污染比较严重的菌,这三种菌在牛场运动场中的检测率最高,运动场是该地区牛场污染比较严重的区域。甘肃地区生鲜乳样品中芽孢杆菌属、金黄色葡萄球菌和不动杆菌属的检出率依次为75.36%、39.13%和21.74%;芽孢杆菌属在牛场青贮饲料、贮奶罐内壁、牛舍垫料和运动场中均可检测到,以在青贮饲料和运动场中检出数较多;金黄色葡萄球菌在青贮饲料、牛舍垫料和运动场中都有检测到,以在运动场和牛舍垫料中检出数较多;不动杆菌属在青贮饲料、奶罐内壁和运动场中检测到,且在运动场中检出数较多。