【摘 要】
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辣椒是一种重要的茄科蔬菜,土传病害多,尤其在高温高湿条件下发生严重,常导致其减产甚至绝收。阐明其抗病机制是促进辣椒抗病遗传改良,促进其可持续发展的重要基础研究。RZFP
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辣椒是一种重要的茄科蔬菜,土传病害多,尤其在高温高湿条件下发生严重,常导致其减产甚至绝收。阐明其抗病机制是促进辣椒抗病遗传改良,促进其可持续发展的重要基础研究。RZFP(RING zinc finger protein)是植物中一种重要蛋白家族,已经发现其中的部分成员在植物应答逆境胁迫和生长发育调控中起重要的调节作用,但辣椒基因组中该家族成员的作用及其机制还鲜有报道。本研究从辣椒cDNA文库中分离获得一个RZFP的全长cDNA,并对其表达及其功能进行了初步研究。主要结果如下:1、从辣椒cDNA文库中分离获得一个辣椒RZFP阳性cDNA克隆,测序结果表明该克隆长度为1149bp,含有编码220个氨基酸残基的开放读码框(ORF),其推导氨基酸序列与辣椒、水稻、玉米、苜蓿和拟南芥中的锌指蛋白编码基因(登录序列号依次为:ACN63363.1、NP-001150153.1、XP-003611911.1、NP-001067361.1、XP002880526.1)的同源性分别为 79%、56%、64%、62%、60%。2、采用荧光定量PCR分析结果表明,该基因在青枯菌侵染下转录表达量上调,但在高温、高盐和机械损伤等非生物逆境胁迫下表达下调。3、构建了CaRZFP 超表达载体并进行了测序验证,利用农杆菌介导的遗传转化方法转化烟草K326,获得了 14个阳性克隆,经PCR验证其中有8个阳性转基因植株。通过栽培获得了其相应的T1代株系的种子。经过卡那霉素浸种筛选,淘汰假阳性种子,并经过常规栽培获得长势一致的T1代烟草幼苗用于CaRZFP3超表达功能分析。4、对超表达转基因T1代烟草幼苗进行高盐胁迫和青枯病病原菌接种抗性鉴定,结果发现CaRZFP3超表达使转基因烟草对高盐和青枯菌侵染的抗性均有所降低。上述结果表明,CaRZFP3可能是辣椒环锌指蛋白家族成员之一,其表达受到青枯菌侵染和高温、高盐和机械损伤等非生物逆境胁迫的影响,可能充当了植物抗青枯病和盐胁迫的负调节因子。
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