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女性生殖系统的调节为人体最复杂的调控系统之一。早在1950年，人们已发现人类女性的生殖功能与营养状态密切有关，营养不良或营养过剩均可造成月经失调，但内在机理一直未能探明。1994年Zhang等利用定位克隆技术首次成功地克隆了小鼠的肥胖基因（ob）与人类的同源序列，随后人们把ob基因的编码产物命名为leptin（瘦素）。已证实leptin为167个氨基酸、分子量为16KD的蛋白激素，其合成与分泌部位主要在脂肪组织。它作为营养状态的外周传入信号作用于下丘脑，参与调节脂肪储存和能量代谢。随着有关leptin研究的深入，leptin与生殖的关系也日益倍受关注。研究发现ob基因突变的小鼠其生殖功能丧失，同时伴有极度肥胖，经leptin治疗后，不仅体重减轻，而且生殖功能恢复。在人类人们发现ob基因突变的患者极其罕见，但在罕见的患者中，发现其激素水平处于低促性腺激素、低性激素状态。由此，Barash提出了leptin为生殖系统的代谢信号，即当体内的营养状态达到一定的临界水平，足以满足生殖需要时，leptin能启动下丘脑-垂体-卵巢轴触发青春期的开始。国外研究表明，下丘脑、垂体、卵巢均有leptin受体（leptin R）表达；leptin能刺激下丘脑神经细胞释放LHRH、刺激垂体细胞分泌LH和FSH，故普遍认为leptin通过与下丘脑-垂体-卵巢轴间接调节卵巢功能。 相对而言，leptin对脂代谢、能量代谢的作用研究国内外报道较多，也较系统；而对生殖系统的作用研究国外报道较少，更未经过系统的研究，其研究方向也着重于下丘脑、垂体，有关卵巢的研究较少或颇有争议；至于leptin是否直接作 浙江大学硕士学位论文用于卵巢、卵巢是否分泌leptin以及leptin是否影响卵泡发育迄今尚不清楚。国内关于Ieptin在生殖调节中的作用研究迄今未见报道。 本课题对 leptin参与生殖调节的机制从以下二方面进行探索：厂）测定自然周期和超排卵周期血清leptin的浓度变化和排卵前卵泡液的leptin浓度，探讨！eptin在自然周期中的生理水平、促排卵对！eptin浓度的影响以及leptin对IVF结局的可能影响。（）从分子生物学水平研究卵巢颗粒细胞 leptin R mRNA异构体的表达和Ieptin mRNA的表达，以探索 leptin对卵泡发育的调节途径。 材料与方法 本研究采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测12例正常生育年龄女性志愿者周期第 3大（月经期）、周期第门大（增生晚期）、周期第 23大（黄体期）血清中卜…h水平：同时选择IO例月经周期规则、因于宫肌瘤或输卵管结扎术后需进腹手术的生育年龄妇女，测定其排卵前卵泡液和同期血清的leptin水平；选择39例因输卵管因素而采用长周期方案的IVF－ET患者，采用ELISA和放射免疫法分别检测患者在注FSH前、注HCG前及注HCG后36小时血清和卵泡液（卵泡直径＞ 18mm）的 lePtin、E。水平，详细记录患者使用促性腺激素的累计剂量、获卵数、成熟卵数、受精率、＊T的胚胎数以及胚胎评分：采用＊T．＊＊R法测定颗粒黄体细胞leptin mRNA和 leptin R mRNA异构体的表达。所有数据用 SPSS 9刀 forWlldOWS软件包处理。 结果 在自然周期中，血清 leptin浓度在增生晚期（6．4土l．9 ＂g／ml）和黄体期（8二土2．4…ml）明显高于月经期（4．9士1．7 n旮ml），P分别功刀5和0刀01：排卵前卵泡液的！eptin浓度（10．8土 1．4 ＂g／ml）和同期血清的 1印tin浓度（7石士 1二 ＂g／ml）相比无显著性差异，P＞0刀5。在超排卵周期中，血清！eptin水平在注HCG前 （26＊士2．3 ＂g／ffil）明显高于注 FSH前（9．3士1刀 ＂g／ml）和注 HCG后 36小时（15．8士2．3 ＂g／ml），P均＜0．001；卵泡液（18．5士2二 ＂g／ffil）和同期血清门．8士2．3 ＂g／ml）的 leptin水平比较无显著性差异，P＞0刀5；超排卵周期的卵泡液和同期血清一tin水平明显高于自然周期的卵泡液和同期血清一tin水平，P＜0刀5；采用直线相关分析显示，从注HCG前至注HCG后36 ．J’时血清leptin浓度的差值与获取的成熟卵个数负相关，，－0．396，P＜0刀5；FSH用药总量与卵泡液内 EZ／12ptifl比值 7———— 浙江大学硕士学位论文一负相关，，0．379，P＜0刀5。分析leptin水平与IVF结局的关系，发现妊娠组的卵泡液和同期血清的1e…n水平门 土1．8 11乡1和8．7士1．5 fi旮ml）明显低于非妊娠组卵泡液和同期血清的 lePtin 7K平（20．8土2．7 ＂g／ml和 18．3士2．9 ＂g／ml），P＜0刀5。妊娠组的卵泡液和同期血清卜在b水平分别与自然周期组的卵泡液和同期血清 leptin水平比较无显著性差异O列刀5）。RTPCR显示卵巢颗粒细胞有ICptin mRNA禾 lePtin R mRNA三种异构体的表达。 结论 1．正常生育年龄妇女血清 l叩n浓度随月经周期发?