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目的:探索多西他赛和吉非替尼序贯应用对携带T790M耐药突变的肺腺癌细胞H1975增殖和凋亡通路的作用。方法：1. Mtt法检测H1975细胞的增殖1.1不同浓度吉非替尼（0、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μM）作用72h后对H1975细胞生长的抑制作用1.2不同浓度多西他赛（0、0.4nM、2nM、0.01μM、0.05μM、0.25μM、1.25μM）作用72h后对H1975细胞生长的抑制作用2.等效线图法（isobolograms）和联合指数（combination index, CI）法评估多西他赛和吉非替尼序贯作用的效价2.1时序方案共分三组：①多西他赛作用24h，吉非替尼序贯48h（DG）；②多西他赛联合吉非替尼作用48h，不含药液的完全培养基继续孵育24h（D+G）；③吉非替尼作用48h，多西他赛继续序贯24h（GD）。2.2等效线图法评价三种给药方案的效价。2.3药物联合指数法评价三种给药方案效价。3.流式细胞术检测细胞凋亡和周期以及Hoechest33258染色法检测凋亡形态3.1实验分六组如下：①对照组（无药物作用）72h（N）；②多西他赛单独作用72h组（D）；③吉非替尼单独作用72h组（G）；④多西他赛作用24h后序贯吉非替尼48h组（DG）；⑤多西他赛联合吉非替尼48h后序贯不含药液的完全培养基继续孵育24h组（D+G）；⑥吉非替尼作用48h后序贯多西他赛24h组（GD）3.2AnnexinV/7-AAD双染色法检测六种给药方案下H1975细胞凋亡。3.3PI单染法检测六种给药方案下H1975细胞周期分布。3.4Hoechst33258DNA染色法检测六种给药方案下细胞凋亡形态4.化学比色发光法检测不同给药方案和凋亡通路相关caspases酶的活性结果：1.吉非替尼和多西他赛对H1975细胞增殖抑制作用MTT结果显示不同浓度的吉非替尼和多西他赛作用72h后均能抑制H1975细胞的生长，且随着药物浓度的逐渐增加，细胞的存活率逐渐降低，呈浓度依赖关系。吉非替尼作用72h后的IC50为10.31±1.05μmol/L、多西他赛作用72h后的IC50为3.03±0.13nmol/L。2.等效线图法和联合指数法评估三种时序给药方案的效价多西他赛序贯吉非替尼方案经过等效线图法和药物联合指数法的评估，表现为协同作用，而多西他赛联合吉非替尼的方案表现为相加作用，吉非替尼序贯多西他赛则主要表现为拮抗作用。协同作用、相加作用和拮抗作用在等效线图中的意义为各个浓度点分别落在等效线围成区域的左侧，内部和右侧。而联合用药指数法的意义为CI值小于1，等于1和大于1。3.流式细胞术检测细胞凋亡和周期以及Hoechest33258染色法检测凋亡形态与正常组相比较吉非替尼单药（7.69±0.48）以及吉非替尼序贯多西他赛（5.37±0.62）方案均未引起H1975明显的凋亡现象，而吉非替尼联合多西他赛同多西他赛单药以及多西他赛序贯吉非替尼组皆诱导产生显著性凋亡（P<0.05），而且多西他赛单药（25.54±1.27）与多西他赛序贯吉非替尼（27.36±0.72）方案较多西他赛联合吉非替尼方案（14.75±1.14）在诱导凋亡结果上也具有明显差异（P<0.05）。细胞周期分布结果中吉非替尼单药主要将细胞抑制在G0/G1期（56.59±3.29）（P<0.05），而单药多西他赛作用后，G2/M期的细胞显著增多（42.57±1.22）（P<0.05），同样在吉非替尼序贯多西他赛方案中G0/G1期细胞高达（57.48±3.63）（P<0.05），而多西他赛序贯吉非替尼组G0/G1期细胞仅占（36.5±2.65），G2/M期细胞比例则为（39.83±1.28）（P<0.05）。Hoechest33258染色法结果显示与正常组相比较，多西他赛单药组与多西他赛序贯吉非替尼组可诱导产生明显凋亡小体，而吉非替尼单药组和吉非替尼序贯多西他赛组未诱导出明显凋亡小体。4.化学比色发光法检测不同给药方案和凋亡通路相关caspases酶的活性化学比色发光法结果中，与其他组相比较多西他赛序贯吉非替尼组caspase3的活性为（2.1±0.19）（P<0.05）。多西他赛组的caspase8的活性为（2.59±0.27）（P<0.05）。所有组的caspase9的活性未得到有统计学意义的结果结论：1.多西他赛序贯吉非替尼在H1975细胞株上可产生明显的增殖抑制作用，主要通过caspase8/caspsae3诱导凋亡。2.多西他赛序贯吉非替尼在吉非替尼耐药的H1975细胞株上具有协同增效作用。