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药物疗效和毒性存在个体差异是临床常见的现象,癌症患者接受化疗时更为明显,一直受到临床医生关注。不少临床因素影响人体对药物的反应,但是随着分子生物学、分子遗传学与分子药理学,特别是基因组学的发展,人们逐渐认识到不同个体对同一药物的不同反应大多源于基因的多态性。
5-氟尿嘧啶(5-FU)自问世以来,一直广泛应用于肿瘤临床,是胃肠道肿瘤和头颈部肿瘤的主要抗癌药物之一。二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidinedehydrogenase,DPD)是5-FU以及口服嘧啶类化疗药物代谢过程中的关键酶,其活性在一般人群存在个体差异。临床上可以见到DPD酶活性部分或完全缺乏的患者接受5-FU化疗后疗效明显,但是出现严重毒副作用。研究表明DPD酶活性受DPD酶基因(dihydropyrimidinedehydrogenasegene,DPYD)多态性的影响,而基因多态性最常见的表现形式为单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphisms,SNP)。为提高5-FU及嘧啶类药物的疗效及预防和减少其毒副反应,更好地实现个体化治疗,检测DPD活性及DPYD的SNP具有重要的意义。
现已经明确30多种不同DPYD的SNP,其中大部分SNP是在DPD酶活性缺乏情况下出现严重临床症状的肿瘤患者中测得,但关于DPYD基因型与表型之间的关系目前不甚明了。VanKuilenburg报道GIVS14+1ASNP几乎完全局限于DPD活性低的患者,DPD活性低的患者SNP检出率达44%,而DPD活性正常的患者为4%,故推荐西欧癌症患者接受5-FU化疗前筛选有无GIVS14+1ASNP的存在。Hui-HuaHsiao等采用限制性酶切法检测300例中国台湾健康人群DPYD的基因多态性,此研究涉及亚洲人群中11种已明确的DPYD基因多态性,发现4种SNP即A74G、T85C、A1627G、G2194A,它们分别位于Exon2,Exon13和Exon18,推测这3个Exon可能是中国人群SNP发生的热点位置。基因多态性具有显著的种族和地域性差异,关于中国大陆人群DPYD基因多态性的相关报道目前少见。
目的:分析中国大陆癌症患者DPYD基因Exon2,Exon13,Exon14和Exon18的单核苷酸多态性(SNP)类型及其发生频率,观察此SNP是否存在种族差异和探讨此SNP与DPD酶活性之间的相关性。
方法:所有血标本来源于中山大学肿瘤防治中心收治的初治鼻咽癌和结直肠癌患者,其中2004年10月到2005年4月随机收集患者血标本,2005年5月到2005年8月收集DPD酶活性低(<2.00)以及DPD活性高(>2.5倍正常值下限5.0)的患者血标本。共收集142例血标本,其中男性100例,女性42例;鼻咽癌患者60例,结直肠癌患者82例。
DPD酶活性测定采用反相HPLC法,通过检测血浆中H2U/U的比值间接反映DPD的活性。采用PCR技术扩增DPYD基因的Exon2,Exon13,Exon14和Exon18外显子,从正反两个方向对扩增片断进行DNA测序和分析。
采用SPSS12.0软件包。非参数单样本Kolmogorov-Smirnovtest检验DPD活性是否符合正态分布;x2检验用于DPYDSNP发生频率与临床资料间相关性的分析;2个独立样本Mann-Whitneytest和k个独立样本Kruskal-WallisHtest分别应用于2组和3组DPD活性间的比较。P值<0.05认为具有统计学意义。
结果:1.DPD活性存在个体差异,其分布不遵循正态分布。DPD活性差异与性别有关,与年龄及肿瘤类型无关。
2.在DPYD基因Exon2,Exon13,Exon14,Exon18中发现4种SNP即T85C、A1627G、T1896C和G2194A。C61T、G62A、A74G、G1601A、T1679G、C1714G和GIVS14+1ASNP在本研究未发现。
3.将T85C、A1627G和T1896C三种SNP与DPD酶活性进行统计学分析,未发现此SNP与DPD活性之间的相关性。
4.将T85C,A1627G,T1896C三种SNP发生频率与临床资料进行统计学分析,发现T1896CSNP在男性患者中的发生率比女性高。
结论:1.DPD活性存在个体差异,活性差异与性别有关;
2.GIVS14+1ASNP存在种族差异;
3.中国癌症患者中位于DPYD2,13,14和18号外显子的SNP与DPD活性之间无明显的相关性,提示DPYD基因型与表型之间可能不存在相关性;
4.T1896CSNP在男性患者中的发生率比女性高。