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目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一,约占颌面部恶性肿瘤的80%以上,在全身范围的恶性肿瘤中居第八位[1]。近年来,口腔鳞癌的发病率呈逐年上升的趋势。目前临床上对口腔鳞癌的治疗方法以手术扩大切除为主,辅以放疗、化疗、生物治疗、靶向治疗、免疫治疗等。虽然对于口腔鳞癌的治疗手段实现多元化及精准化,但因其易发生局部复发及淋巴转移和远端转移而影响口腔鳞癌患者的预后。因此深入了解口腔鳞癌的发病机制、早期诊断及预后分析显得十分迫切。研究证实多种原癌基因及抑癌基因的异常表达可能与口腔鳞癌的发生发展密切相关。mi RNA是一类内源性非编码小RNA,长约18~23 nt。mi RNA因其非编码特性可在翻译水平或者转录后水平调控一个或多个靶基因m RNA及靶蛋白的表达水平[2]。CDKN1B(p27kip1)是近来新发现的一种肿瘤抑制基因,其是细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白CDKI家族的最新成员,其与细胞周期关系密切,可以阻断细胞从G1期到S期。本研究通过对人舌鳞癌细胞株TCA-83瞬时转染mi RNA-222模拟物及抑制物,同时设立阴性对照,分析其靶基因CDKN1B(p27kip1)m RNA差异性表达及其靶蛋白在口腔鳞癌细胞中的表达差异,探讨mi RNA-222对口腔鳞癌细胞中CDKN1B(p27kip1)的靶向调控作用,以期对口腔鳞癌的早期发现、准确诊断、靶向治疗等提供一定的理论基础。方法:1通过LipofectamineTM2000转染试剂将人工合成的mi RNA-222mimics(mi RNA-222上调组)和inhibitor(mi RNA-222下调组)转染人舌鳞癌细胞株TCA-83,同时设立阴性对照组及空白对照组。应用反转录-聚合酶链式扩增技术(RT-PCR)分别检测mi RNA-222模拟物及抑制物转染组及阴性对照组、空白对照组中CDKN1B(p27kip1)基因m RNA的表达量,流式细胞术检测各组细胞中靶基因蛋白CDKN1B(p27kip1)的表达情况。2统计学方法:应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理,计量资料用均数±标准差(Mean±SD)表示,均经正态检验符合正态分布(P>0.05),采用单因素方差分析(one-factor ANOVA)进行组间两两比较,P<0.05,结果具有统计学意义。结果:1 RT-PCR检测CDKN1B(p27kip1)m RNA的表达量空白对照组(0.35±0.02)与mi RNA-222 mimics转染组(0.31±0.04)及mi RNA-222 inhibitor(0.40±0.01)转染组相比较,P=0.031<0.05,P=0.015<0.05,差异有统计学意义;阴性对照组(0.35±0.03)与mi RNA-222 mimics转染组及mi RNA-222 inhibitor转染组相比较,P=0.037<0.05,P=0.012<0.05,mi RNA-222 mimics转染组与mi RNA-222 inhibitor转染组相比较,P=0.037<0.05,差异均有统计学意义;空白对照组与阴性对照组相比较,P=0.928>0.05,差异无统计学意义。2流式细胞术检测CDKN1B(p27kip1)蛋白表达量mi RNA-222空白对照组其相应门X-mode值为8.0,FI=lg8.0×340=307.05;mi RNA-222 mimics转染组其相应门X-mode值为5.4,FI=lg5.4×340=249.01;mi RNA-222 inhibitor转染组其相应门X-mode值为13.4,FI=lg13.4×340=383.21。mi RNA-222过表达时其CDKN1B(p27kip1)蛋白含量降低,反之,mi RNA-222抑制后其p27kip1蛋白含量升高。3人舌鳞癌细胞株TCA-83中mi RNA-222对CDKN1B(p27kip1)的调控作用mi RNA-222过表达时其CDKN1B(p27kip1)m RNA表达量为0.31±0.04,蛋白表达量FI=249.01,CDKN1B(p27kip1)m RNA及蛋白表达量较空白对照组及阴性对照组均降低,反之,mi RNA-222抑制后其CDKN1B(p27kip1)m RNA(0.40±0.01)及蛋白表达量(FI=383.21)均较空白对照组及阴性对照组升高。结论:1脂质体介导转染mi RNA-222 mimics后可使人舌鳞癌细胞株TCA-83中mi R-222过表达,反之,转染mi RNA-222 inhibitor后会抑制其表达。2 mi RNA-222负调控CDKN1B(p27kip1)m RNA及其蛋白的表达。3在口腔鳞癌中CDKN1B(p27kip1)可能是mi RNA-222的靶基因,提示mi RNA-222与口腔鳞癌的发生关系密切,有可能成为诊断口腔鳞癌新的肿瘤标记物,为口腔鳞癌的早期发现、准确诊断及靶向治疗提供一定的理论依据。