蛇足石杉的芽胞繁殖及其生物碱的组织化学定位与活体释放研究

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蛇足石杉是一种传统的中草药,已有上千年药用历史。我国科学家在上世纪80年代从中提取分离得到了石杉碱甲。石杉碱甲属于生物碱类物质,是一种具有高效、低毒、高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂,对于治疗老年痴呆、重症肌无力、记忆力衰退等疾病具有良好疗效。本论文共进行了以下五个部分的实验:(1)研究培养基种类、培养温度和光照强度以及激素对蛇足石杉芽胞萌发的影响条件,并对萌发过程中对其生长发育形态进行观察。结果表明蛇足石杉芽胞萌发最佳培养温度为(22±2)℃;Moore为最佳培养基,萌发率最高,约82%,植株根平均长度约14.6mm;Knudson C培养基次之,萌发率约64%,植株平均长度约为5.2mm。暗培养适宜芽胞萌发及不定根生长,萌发率高达92%,平均根长9.1mm,800lx弱光照培养不定根生长缓慢,平均根长8.7mm;1600lx光照对根的生长有一定的抑制作用。激素对于芽胞萌发与生长有一定抑制作用。(2)研究了湘西蛇足石杉中不同年龄阶段石杉碱甲含量顺序:幼苗>成株>幼株;在根、茎、叶中的石杉碱甲也有一定分布的规律,即叶>茎>根。(3)研究了蛇足石杉的生物碱在植株各个形态学部位分布情况,新鲜材料的切片染色结果显示,蛇足石杉的生物碱主要分布在茎中柱维管周边细胞区域以及皮层细胞中;在叶片主要集中于气孔周围的细胞中;而根部只隐约可见桔红色颗粒分散于皮层内外及表皮细胞。(4)得到了蛇足石杉活体释放法提取石杉碱甲的最佳工艺条件:将采收来的植株浸泡于0.75%酒石酸质量分数,料液比为1∶36(g/ml),释放43min,在此条件下石杉碱甲平均释放量为8.55×10-7g,与预测值接近,表明方法可行。(5)研究了蛇足石杉活体释放的次数对提取量的影响,按最佳工艺条件进行石杉碱甲含量的测定,将提取完的植株用无菌水淋洗,用溶液A浸泡一段时间后,将植株重新栽培在采收的地方,并喷施溶液B,观察,发现较第一次释放量提高了1.5‰,平均存活率达30%。
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