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白塞综合征(BS)是一种复发性全身性血管自身免疫/炎症性疾病。BS具有高度异质性,表现为多器官受累,包括口腔和生殖器溃疡、眼炎和皮肤损伤,严重影响患者生活质量。随着疾病的进展,由于血管瘤破裂或严重的神经并发症,BS病人甚至可能出现生命危险。然而,尽管为研究BS付出了很多努力,但几乎没有发现有助于诊断BS的特异性实验室标志物,而且发病机制在很大程度上是未知的。本研究从血浆蛋白、糖基化和自身抗体出发,寻找筛选和鉴定特异性和敏感度更好的BS特异性生物标志物,并探索特异性分子与BS发病机制的关联。本论文主要研究内容分为以下三个章节:第一章白塞综合征患者血液蛋白质组学的研究血浆中含有丰富的蛋白,是执行人体功能的重要分子,是理想的用于疾病生物标志物筛选的样本来源。如今,高通量组学平台使我们能够获得大量人体生理和病理信息。本研究旨在阐明与白塞综合征(BS)患者的异质性,以及不同受累器官的蛋白质组学特征和发病机制,鉴定BS患者临床评估和治疗的生物标志物。运用数据非依赖性质谱和抗体芯片构建的深度蛋白质组学平台,我们检测了98例BS患者和31例健康对照血浆样品中759个蛋白质的表达水平。其中220个与BS相关的差异表达蛋白质(p<0.05)。通过热图聚类分析,130个p<0.05的差异蛋白能将88.6%的BS病人和95.5%的健康对照很好地区分开来。生物信息学分析显示,这些差异表达的蛋白质参与了与BS致病有关的不同生物学过程,包括补体激活,伤口愈合,血管生成,白细胞介导的免疫等。此外,首次构建了多器官受累的BS患者的蛋白质组学图谱,提供了与不同器官受损的白塞综合征患者亚群相关的差异蛋白质特征谱,以及指导将来临床靶向治疗的潜在的蛋白质靶标。最后,通过使用酶联免疫吸附法,在108例BS和29例健康对照的构成的独立队列中验证了与疾病严重程度和血管受累相关的生物标志物-HABP2,TNC和SERPINA3,其水平升高可用于血管BS患者的临床评估和潜在的治疗靶标。第二章白塞综合征免疫球蛋白的糖基化研究B细胞的激活和免疫球蛋白的异常增加与BS表型存在相关性。越来越多的研究关注免疫球蛋白的糖基化谱的改变在自身免疫性疾病中的价值,而免疫球蛋白的效应功能在很大程度上取决于它们的糖基化结构。本研究的目的是探讨BS患者免疫球蛋白糖基化结构的改变图谱,进而鉴定用于诊断和鉴别诊断的糖基化标志物。通过芯片技术方法,我们首先对97名BS患者、30例健康对照和各15例疾病对照(大动脉炎、ANCA相关血管炎和干燥综合征)血浆中免疫球蛋白蛋白质组(IgG、IgG1-4、IgA、IgA1-2)的浓度进行了定量。通过凝集素芯片的初步血浆筛选,我们总共鉴定了 8种免疫球蛋白及其亚型的47种凝集素结合糖结构的改变。对个体血浆免疫球蛋白水平进行校正后,运用统计学分析比较了各组之间糖基化标志物的水平。我们发现相较于健康对照和疾病对照,与33种凝集素结合的免疫球蛋白特异性聚糖水平与BS显著相关。IgG聚糖的改变最普遍,占所有改变的87.9%(29/33)。除外刺桐凝集素识别的Galβ4GlcNAc在BS中显著降低外,其他32个指标都在BS中显著升高。其中,13种IgG聚糖和1种IgA聚糖的改变在BS中表达水平的倍数变化大于1.2。本研究首次揭示了BS患者血浆免疫球蛋白及亚型糖结构的改变,候选标志物将在更大的队列中进行验证。该结果在阐明发病机制和识别BS新生物标志物方面的具有重要意义。第三章白塞综合征自身抗体的研究自身抗体是由免疫系统产生的针对自身的一种或多种蛋白质的抗体,其产生对多种自身免疫性疾病的发生发展至关重要。自身抗体对于自身免疫性疾病具有重要的诊断价值。研究已经报道了几种BS相关特异性自身抗体,然而由于敏感性较低或特异性较差,且缺乏更大规模的队列验证,限制了其在临床中的进一步应用。本研究运用一种全新的蛋白质组学技术手段-核酸可编程蛋白质芯片(Nucleic Acid Programmable Protein Array,NAPPA)开展40例BS患者和20例健康对照血浆的筛选,以期鉴定特异性和敏感度更好的BS特异性自身抗体。通过对阳性信号点的判断和人工打分,确定候选潜在自身抗体标志物分子。我们发现多个BS血浆反应呈阳性的潜在靶抗原,其中IgG的反应性明显高于IgA。六个蛋白被鉴定为潜在的BS 相关自身抗体的靶抗原分子:CCDC134-IgG/IgA,GOT2-IgG/IgA,SGK1-IgG/IgA,SIX3-IgG,NDUFB8-IgG,GPR62-IgG/IgA。接下来,我们运用用ELISA或Western blot方法在98例BS患者和41例健康对照构成的独立队列中进行验证。ELISA方法结果表明,抗SIX3抗体、抗CCDC134抗体、抗GOT2抗体和抗SGK1抗体水平BS组和健康对照组之间不存在统计学差异或者与初筛的趋势相反;Wsetern blot方法结果表明,BS和HC的混合血浆pool对SGK1和CCDC134均无反应性,对GOT2有反应性而组间比较无差异。对于候选蛋白,GPR62,NDUFB8和SIX3,接下来将进一步通过ELISA等方法在独立队列中进行验证。