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目的:本研究通过建立P388/VCR细胞白血病多药耐药动物模型,并抽取腹水、外周血液及骨髓涂片,与正常对照组比较,以白血病细胞数鉴定动物模型是否成功;以白血病多药耐药裸鼠模型用药后情况、动物模型生活质量等判定复方解毒化瘀中药大、中、小剂量组与长春新碱配伍使用逆转白血病多药耐药效应,通过检测白血病细胞多药耐药蛋白(P-gp),以探索复方解毒化瘀中药逆转白血病多药耐药可能的分子生物学机制。方法:(1)细胞的培养:分别将白血病细胞株P388及白血病细胞耐药株P388/VCR置于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中,在37℃、饱和湿度、5%C02条件下培养传代。分别取对数生长的白血病细胞,在无菌条件下给每只裸鼠腹腔直接接种0.2m1(浓度为1×107个/ml)细胞悬液,待腹水瘤摸型建立后,将裸鼠随机分成正常对照组、模型组、长春新碱治疗组、实验1组(大剂量复方解毒化瘀中药+长春新碱组)、实验2组(中剂量复方解毒化瘀中药+长春新碱组)、实验3组(小剂量复方解毒化瘀中药+长春新碱组)共6组,分别给裸鼠蒸馏水、生理盐水灌胃,长春新碱腹腔注射,大、中、小剂量的中药灌胃联合腹腔注射长春新碱,体积均为0.1ml/10g体重。其中,长春新碱2天给药1次,连续5次;复方解毒化瘀中药每天给药1次,连续用药10天。在实验过程中每2天检查1次外周血象。造模型前、给药后动态观察各组裸鼠精神、饮食及体重变化,注意腹水、瘤块形成情况及裸鼠生存情况。(2)采用MTT法分别检测体外、体内P388/VCR耐药细胞的耐药倍数。(3)白血病细胞数:分别取造模裸小鼠外周血、腹水离心(离心的细胞用25μ l胎牛血清混匀)及裸鼠胸骨骨髓用25μl胎牛血清混匀,迅速涂片,吉姆萨染色,油镜下观察细胞形态,按细胞形态计算白血病细胞(原始+早幼粒细胞)百分比,鉴定动物模型是否成功。(4)实验结束前根据裸鼠的精神、饮食状况以及抽取裸鼠腹水、外周血或胸骨骨髓涂片,观察腹水、外周血及骨髓原始+早幼粒细胞百分比,P-gp的表达情况,并测量裸鼠瘤块体积,观察白血病耐药细胞株裸鼠模型缓解情况。(5)于停止给药、给水次日抽取裸鼠外周血,用流式细胞术对裸鼠外周血进行荧光标记检测,观察结果判断白血病耐药细胞株P388/VCR中耐药蛋白P-gp的表达。结果:(1)裸鼠腹腔注射0.2ml/只细胞量为1×107个/ml,腹水平均形成时间为5.38±0.84天,瘤块平均形成时间为8.63±0.67天;在整个实验过程中裸鼠接种白血病细胞前体重随时间延长,体重增加;接种白血病细胞后约5-8天时,裸鼠腹水、瘤块形成时体重明显增加,随时间的延长模型组裸鼠精神、饮食变差,出现恶病质,体重明显下降,而用药组裸鼠精神、饮食较模型组明显改善,体重下降缓慢,以大、中剂量中药组为甚。(2)MTT法测定体外培养P388/VCR细胞耐药倍数5.72倍;接种于裸鼠体内后测得其耐药倍数为4.8倍,体内、外P388/VCR耐药倍数相比,体内耐药倍数有所减低,但是仍保持耐药特性。(3)接种白血病耐药细胞后裸鼠腹水、瘤块形成时,分别抽取外周血、腹水及胸骨骨髓涂片均有白血病细胞浸润,且每张涂片均有有核细胞大于200个/片。(4)白血病耐药细胞株裸鼠模型的缓解情况:长春新碱治疗组缓解为(1/6),实验1组为(4/6),实验2组为(3/6),实验3组为(1/6),实验1组、实验2组白血病缓解情况更好,而单纯长春新碱治疗组及实验3组白血病缓解情况较差。(5)流式细胞学检测裸鼠外周血细胞膜P-gp表达,正常对照组几乎无P-gp表达,模型对照组P-gp高表达,长春新碱治疗组与小剂量中药联合长春新碱组P-gp表达均有所降低,但两者相比较无明显统计学意义(P>0.05),经小剂量中药组与大、中剂量中药组联合长春新碱组相比较有显著差异(P<0.01),P-gp表达明显降低;经大、中剂量的复方解毒化瘀中药联合长春新碱组可以更好的降低P-gp的表达,二者相比较有统计学差异(P<0.05)。结论:P388/VCR白血病耐药细胞株接种于裸鼠腹腔后,在体内仍保持细胞耐药特性;实验组裸鼠精神、饮食、活动等情况较模型组明显改善,体重下降缓慢,以大、中剂量组为甚;复方解毒化瘀中药能逆转白血病耐药细胞株P388/VCR的机制可能与降低多药耐药蛋白P-gp的表达有关;复方解毒化瘀中药可以降低P388/VCR耐药细胞裸鼠模型P-gp的表达,其降低作用呈剂量依赖性。