磷脂酶A<,2>(PLA<,2>)广泛存在于各种蛇的毒液中,它能酶促水解甘油磷脂的第二位酯酰键,生成溶血磷脂和脂肪酸,并且具有多种药理学功能.从江浙蝮蛇毒液中分离得到酸性PLA<,2>(APLA<,2>)、碱性PLA<,2>(BPLA<,2>)和中性PLA<,2>(NPLA<,2>)三种PLA<,2>,其中APLA<,2>能抑制血小板聚集,NPLA<,2>属于突触前神经毒素,BPLA<,2>则具有溶血活性.PLA<,2>分子量只有14kD左右,却具有众多的药理学活性,它既是基础研究的重点,又具有 潜在的药用价值.将江浙蝮蛇毒APLA<,2>基因克隆至表达载体pBLMVL2,经过温敏诱导,表 达产物APLA<,2>约占细菌蛋白质总量的30%,并以包含体的形式存在.考虑到BAPLA<,2>-II结构的特殊性对它进行研究能提供较多的结构与功能关系的信息.之后,对APLA<,2>的Glu6、Asp115、Tyr118和Trp119进行定点突变,得到突变体MAPLA<,2>I(E6R)、MAPLA<,2>II(D115K)、MAPLA<,2>III(E6R,D115K)、MAPLA<,2>IV(Y118M)、MAPLA<,2>V(W119T).将突变体基 因克隆至含有P<,L>启动子的表达载体pBLMVL2,在肠杆菌RRl中得到了高效表达.考虑到尖 吻蝮蛇和江浙蜊蛇同属蝮亚科,对尖吻蝮蛇PLA<,2>能够为PLA<,2>结构与功能关系的研究提供更多的信息.将尖吻蝮蛇毒四个磷脂酶A<,2>同功酶基因克隆至表达载体pBLMVL2,在大肠杆菌RRl中成功表达.通过上述研究,首次从江浙蝮蛇和尖吻蝮蛇中克隆到二组PLA<,2>同功酶的共九个基因,并且进行了结构与功能关系的研究工作.结果首次证明PLA<,2>的N端(1-13位残基)的带电性质影响了它的酶活性大小,并且阐明正负电荷数比例与酶活性大小的关系,从而提出了除质子传递系统、疏水通道和Ca<2+>结合环以外另一个与酶活性有关的结构 部位;第一次用实验结果阐明了APLA<,2>分子上与抑制血小板聚集活性有关的结构部位;而且还提出了在PLA<,2>结构中可能与溶血活性有关的氨基酸残基.