砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)在离体培养中外植体玻璃化和褐变现象严重，且受其基因型影响再生率低，建立优良的离体培养体系及用于遗传转化的高效稳定的再生体系一直是组织培养中待以克服的难点。本试验以我国砂梨主栽品种黄花为试材，研究了防止试管梢玻璃化和褐变的一系列措施，并以黄花梨叶片为外植体研究了影响愈伤组织诱导率的几个因素。探索通过黄化措施诱导腋生芽萌发，将有强大腋生芽萌发力的黄化试管梢基部作外植体进行了转基因初步研究。主要研究结果如下：1．以砂梨栽培品种黄花为试材，研究了固化剂不同种类及琼脂不同用量、糖源和6-BA对防止玻璃化梢的作用以及水杨酸和活性炭对防止试管梢褐变的作用。结果表明：不同固化剂由于其不同的理化性质，Phytagel较Agar powder和卡拉胶对防止试管梢玻璃化现象的效果好；随着琼脂浓度或蔗糖浓度的增加，试管梢玻璃化率均呈下降趋势，在兼顾玻璃化率和繁殖系数的前提下分别选择Agar powder 0.6％和蔗糖3％为最佳使用浓度；6-BA的浓度越高玻璃化现象越严重，选用6-BA 3mg／L为无菌梢的继代浓度。低浓度(10μmol／L)的水杨酸和适量(3～5g／L)的活性炭均可有效防止试管梢褐变。2．以黄花梨叶片为外植体，研究了生长调节剂的不同搭配、2.4-D和6-BA的不同浓度配比、叶片不同部位和Cef对叶片愈伤诱导率的影响及不同添加物对愈伤组织生长的影响。试验发现：在不同生长调节剂的搭配中，2.4-D和6-BA的搭配得到了最高的愈伤组织诱导率(33％)，将两者的浓度分别设为2.4-D 1mg／L和6-BA 0.1mg／L时得到了较高的愈伤诱导率(85％)；低浓度(100mg／L)的Cef对愈伤诱导率有促进作用；叶片的不同的部位中，接近叶柄(带叶柄)的部位愈伤诱导率最高(83％)；不同添加物对愈伤组织的生长影响不同，添加椰乳时对愈伤组织的增殖有明显促进作用。3．将黄花梨健壮的试管梢放置在黑暗处进行黄化处理时，梢基部会明显膨大，在继续进行暗处理后膨大的梢基部上可萌发出大量的腋生芽，本试验统计每个黄化的梢基部约萌发80个腋生芽。在可溶性蛋白SDS-PAGE图谱中发现，黄化梢基部和正常梢基部存在着可溶性蛋白的条带差异。另外，以黄化的黄花梨试管梢基部为外植体初步进行了农杆菌介导的遗传转化试验，得到了具有GUS活性的转基因梢。