用化学修饰方法对蛋白质进行改造具有重要的生物医学意义,可以延长蛋白质药物的循环半衰期,提高药效,降低副作用。其中蛋白质的聚乙二醇修饰技术具有较大优越性。本文以琥珀酰亚胺基单甲氧基聚乙二醇羧甲酯(SCM-mPEG)为修饰剂,以重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)为目标蛋白对聚乙二醇修饰蛋白质技术进行了较为系统的研究。首先对修饰条件进行了优化,采用正交试验和单因素试验结合系统地考察了各因素对蛋白质平均修饰度和生物活性的影响以及修饰度和生物活性之间的关系,并确定出最佳的修饰方案。在此条件下,蛋白平均修饰度为50%,生物活性为天然蛋白的40%左右。为了得到纯净的修饰产物,对PEG修饰G-CSF的反应混合物进行了分离、纯化。采用SephadexG-25凝胶色谱、SP Sephrose Fast Flow和 Source Q30离子交换色谱结合技术除去小分子游离基团、未反应的蛋白质和过量的PEG试剂并分离各修饰组分。为了分析鉴定修饰产物,本文采用TNBS法和荧光胺法测定修饰度,并进行比较。用SDS-PAGE电泳和MALDI-TOF MS分析产物的分子量分布,得到了可以相互印证的结果。本文用NFS-60细胞株/MTT比色法对修饰产物的生物活性进行了测定。研究表明经PEG修饰之后的rhG-CSF体外细胞活性虽然有所下降,但热稳定性和抗胰酶降解的能力均有明显提高。本文还对修饰产物的稳定<WP=5>保存条件进行了探索,人血清白蛋白和甘露醇是两种效果较好的保护剂,在它们的存在下,PEG-G-CSF偶联物溶液在4℃放置一个月后活性保留了92%,三个月后保留了51%。