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目的:观察冷冻(Cryotherapy,Cryo)、多西紫杉醇(Docetaxol,DT)及冷冻联合多西紫杉醇对前列腺癌细胞PC3生长、增殖和抑制作用、细胞周期的影响。
方法:体外培养前列腺癌PC3细胞,应用光镜、透射电镜、四甲基噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察1umol/L、0.1umol/L、0.01umol/L多西紫杉醇和-20℃Cryo、-40℃Cryo在体外单一或协同对前列腺癌细胞系PC3的生长、凋亡诱导、细胞DNA含量及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。
结果:冷冻和多西紫杉醇能引起PC3细胞产生凋亡形态学改变。MTT试验观察到自0.01μ mol/L~1μ mol/L,DT对PC3细胞存活和生长抑制作用逐渐增强,从32.10%~55.4%(P<0.05),呈浓度依赖性。-20℃至-40℃,Cryo对PC3细胞存活和生长抑制作用逐渐增强,从70.2%~80.5%(P<0.05),呈温度依赖性。-20℃恒定条件下,DT浓度自0.01μ mol/L-1μmol/L,对PC3细胞的存活和生长抑制作用增强,从76.9%~89.3%(P<0.05),呈温度与浓度依赖性。流式细胞术结果显示经0.01μ mol/L~1μmol/L DT作用48小时后,G0/G1期细胞比例逐渐下降,分别为36.3%、22.0%、17.5%;而G2/M期细胞比例逐渐升高,分别为52.1%,69.9%,71.9%。-20℃至-40℃,G0/G1期细胞比例分别为28.1%、23.6%,比例逐渐下降,G2/M期细胞比例逐渐升高,分别为52.9%,65.8%,呈温度依赖关系。在-20℃恒定条件下,DT浓度自0.01μmol/L~1μ mol/L,G0/G1期细胞比例逐渐下降,分别为25.9%、22.2%、11.0%;而G2/M期细胞比例逐渐升高,分别为62.9%,70.9%,81.0%。冷冻+化疗具有G2/M期阻滞作用,呈温度及剂量依赖关系。免疫组化结果显示多西紫杉醇药物浓度自0.01μmol/L~1μ mol/L,Bcl-2蛋白表达降低从0.19%~0.09%,Bax蛋白表达增强从0.15%~0.29%,从-20℃至-40℃,Bcl-2蛋白表达降低从0.13%~0.11%,Bax蛋白表达增强从0.21%~0.30%(P<0.05)。-20℃恒定条件下,DT浓度自0.01μmol/L~1μ mol/L,Bcl-2蛋白表达降低从0.10%~0.05%,Bax蛋白表达增强从0.31%~0.3596。
结论:冷冻联合多西紫杉醇能够协同抑制PC3细胞体外生长、增殖能力,促进细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞周期进展。