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肺癌是目前发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,严重危害人类健康。实现对肺癌的有效诊断对提高肺癌患者生存质量、延长寿命意义重大。临床常用的肺癌血清标志物指标在肺部的良性疾患或其它肿瘤中也有不同程度的升高,缺乏对肺癌诊断的特异性。寻找提高肺癌有效诊断率的特异性标志物势在必行,而蛋白质组技术平台的建立为高通量筛选肿瘤标志物提供了有力的技术支持。研究蛋白质组学的3大技术支柱是双向凝胶电泳技术、质谱技术和生物信息学。 肿瘤血清蛋白质组学分析方法是蛋白质组学技术和肿瘤免疫学方法相结合的寻找肿瘤标志物新方法。利用蛋白质组学能同时分离肿瘤细胞大量蛋白质的优势,结合抗原抗体反应高度特异性的特点,高通量筛选出与肿瘤免疫反应密切相关的肿瘤相关抗原,经质谱技术鉴定蛋白质性质;应用基因工程技术,表达出这些肿瘤相关抗原的基因工程产物,评价其抗原性在肿瘤的血清学诊断中的应用价值,为肿瘤早期诊断提供特异性强的检测指标。 本研究采用肿瘤血清蛋白质组学分析方法首先建立肺腺癌组织与肺腺癌患者血清、良性肺病患者血清的蛋白质印迹反应图谱,筛选出反应差异蛋白质点并进行质谱鉴定,获取肿瘤相关抗原的蛋白质信息;应用基因工程技术,克隆并表达出这些肿瘤相关抗原的基因工程产物,最后用肺腺癌血清对表达蛋白的抗原性进行初步鉴定。 材料和方法: 1.肺腺癌肿瘤相关抗原的筛选和鉴定 1.1 双向电泳裂解液提取两例肺腺癌组织可溶性总蛋白,Bradford方法测定蛋白样品浓度,作为分析型凝胶和制备型凝胶的蛋白上样量的依据。