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目的：为半夏块茎腐烂开发高效的生物防治技术体系，对贵州省半夏块茎腐烂病病原菌进行分离鉴定，并从半夏根际土壤筛选其拮抗菌。 方法：采用组织分离法进行病原菌分离，根据柯氏法则进行致病性测定；采用稀释涂布平板法分离纯化半夏根际土壤微生物，通过平板对峙法和琼脂打孔法筛选拮抗菌；结合菌落、孢子形态特征和ITS、TEF构建系统进化树对病原真菌进行鉴定。通过形态学、生理生化特性和分子生物学的方法对病原细菌和拮抗菌进行鉴定。 结果： 1、从贵州3个半夏产地共采集到86份患病样品，共分离出111株微生物，致病性测定其中12株细菌和10株真菌具有致病性，病症与田间相同。12株致病细菌被鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种；6株致病真菌为尖孢镰刀菌（ZJ、Z3、H1441、H14341、D16、D259），4株为茄病镰刀菌（D3、D5、H1、H14121）。 2、从贵州省大方县、赫章县、遵义县半夏根际土壤和贵阳市黔灵山土样中共分离357株细菌，其中9株细菌对病原菌具有抑菌活性。6株（HM9-1、HM9-2、HD3、HK2、GZDF1、DFJ）细菌只对病原细菌有强抑菌活性，3株（GZDF2、GZDF3、GZDF4）细菌对病原细菌和病原真菌都有较强的抑菌活性。经鉴定，HM9-1、HM9-2、HD3、HK2为巨大芽孢杆菌，GZDF1为苏云金杆菌，DFJ为枯草芽孢杆菌，GZDF2、GZDF3、GZDF4为短短芽孢杆菌。 结论： 1、贵州省半夏块茎腐烂病的病原菌有病原细菌和病原真菌，病原细菌的致病性要强与病原真菌，病原细菌和病原真菌都能单独引起半夏块茎腐烂病，也可以复合侵染引起半夏块茎腐烂病。 2、半夏根际土壤中含有丰富的生防菌资源，从半夏根际土壤中分离到了3株对半夏块茎腐烂病病原细菌和病原真菌都具有强抑菌活性，具有开发成生防菌剂的潜力。