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目的：金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B，SEB）既是一种毒素性物质，又是葡萄球菌肠毒素家族9个血清型中最重要和研究较多的超抗原。SEB作为一种超抗原，无需经过抗原递呈细胞的识别和加工，就可以直接通过桥联抗原递呈细胞的MHCⅡ类分子结合槽外侧区与T淋巴细胞TCR的Vβ区，刺激机体免疫系统大量的T细胞活化。通常SEB进入机体后，初期可短暂激活Vβ8~+T细胞并诱发大量增殖，继而过度增殖的细胞发生凋亡导致克隆清除，而出现中枢或外周耐受。尽管有许多关于SEB对成年动物及新生鼠免疫器官、T淋巴细胞及细胞因子影响的研究，但妊娠期母鼠接触SEB对子代新生鼠细胞免疫的影响，目前国内外未见报道。因此，我们选用妊娠16天孕鼠尾静脉注射15μg SEB，同时建立PBS对照，在子代新生鼠出生后第0-5天检测胸腺、脾脏及外周血中CD4/CD8T细胞及TCR Vβ8~+T细胞亚群；通过新生鼠胸腺体外培养观察ConA或SEB刺激后胸腺细胞的分化发育；通过脾脏淋巴细胞体外培养观察其对ConA或SEB刺激的增殖应答情况。方法：1.选用清洁级成年SD大鼠，交配及确定受孕后，孕鼠饲养至妊娠16天随机分组，每组12只，实验组（SEB组）孕鼠通过尾静脉注射15μg的SEB，同时设立对照组，给予等体积的PBS（磷酸盐缓冲液）。2.在妊娠期满（21天）时，用4%水合氯醛麻醉孕鼠后打开腹腔和子宫，取出胎鼠并分离胸腺和脾脏，称量胎体、胎盘、胸腺及脾脏的干湿重。3.在新生鼠出生后的第0-5天，获取每组新生鼠的胸腺、脾脏和外周血，用网搓法制备胸腺及脾脏的单细胞悬液，脾脏的单细胞悬液及外周血用红细胞裂解液去除红细胞。将获得的细胞悬液分为两份，一份用荧光抗体CD3-FITC、CD4-APC和CD8-PE进行细胞染色，另一份用Vβ8.2-FITC、CD4-APC和CD8-PE进行染色，染色后经流式细胞仪检测T细胞亚群的比例。4.无菌分离出生后第0天的两组新生鼠胸腺，采用胸腺器官培养法（thymus organculture，TOC）进行体外培养，并加入ConA或SEB共培养三天。在培养结束时收集胸腺并制备单细胞悬液，染色后经流式细胞仪检测胸腺中T细胞亚群的比例。5.无菌分离出生后第3天的两组新生鼠脾脏，用淋巴细胞分离液分离脾脏淋巴细胞，体外与ConA或SEB连续共培养三天。在第1、2、3天培养结束时，收集脾脏淋巴细胞，染色后经流式细胞仪检测脾脏中T细胞亚群的比例。若检测脾脏淋巴细胞增殖能力时，在每一时间点结束前5小时加入3H-TDR共培养至结束，然后通过γ计数仪检测rpm.结果：1.妊娠期母鼠接触SEB后对胎鼠体重等指标的影响妊娠期第16天母鼠静脉注射SEB后，可明显减少胎鼠胸腺及脾脏的湿重和干重(P<0.01)；但与PBS组比较，SEB组的胎体及胎盘的干、湿重无统计学差异。2.妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠中枢及外周CD4/CD8T细胞亚群的影响2.1妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠胸腺中CD4/CD8T细胞亚群的影响妊娠期第16天母鼠接触SEB后，在新生鼠出生后的第0-5天，SEB组新生鼠胸腺中CD4~+T细胞的比例明显高于PBS组(P<0.01或P<0.05)，而SEB组CD8~+T细胞的比例明显低于PBS组的(P<0.01或P<0.05)。2.2妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠脾脏中CD4/CD8T细胞亚群的影响在新生鼠出生后第0-5天，SEB组新生鼠脾脏中CD4~+T细胞的比例在各时间点均明显高于PBS组(P<0.01或P<0.05)。但两组在各时间点的CD8~+T细胞比例无统计学差异。2.3妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠外周血中CD4/CD8T细胞亚群的影响在新生鼠出生后第0-5天，PBS组和SEB组新生鼠外周血CD4~+T细胞与CD8~+T细胞亚群比例的总体变化趋势与脾脏中的相类似。两组外周血中CD4/CD8T细胞比值均呈上升趋势，从第0-1天的比值小于1逐渐增加到之后的大于1，但SEB组在各时间点的CD4/CD8T细胞的比值均明显高于PBS组(P<0.01或P<0.05)。3.妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠中枢及外周TCR Vβ8.2~+T细胞的影响妊娠期第16天母鼠接触SEB后，在新生鼠出生后的第0-3天，SEB组新生鼠胸腺中的CD4~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例较PBS组的明显减少(P<0.01或P<0.05)，在第4-5天两组的CD4~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例趋于平稳，且无统计学差异；而在出生后的第0-5天，SEB组新生鼠胸腺及外周血中CD8~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例及外周血中的CD4~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例均较PBS组的明显减少(P<0.01或P<0.05)。4.妊娠期母鼠接触SEB对体外培养新生鼠胸腺分化发育的影响4.1妊娠期母鼠接触SEB对体外培养新生鼠胸腺中CD4/CD8T细胞亚群的影响PBS组和SEB组新生鼠胸腺体外与ConA或SEB共培养三天后，SEB组新生鼠胸腺中CD4~+T细胞及CD8~+T细胞的比例在ConA（SEB~+ConA组）或SEB（SEB~+SEB组）刺激后均较PBS组（PBS~+ConA组；PBS~+SEB组）的明显减少(P<0.01或P<0.05)；而SEB组CD4~+CD8~+T细胞的比例较PBS组明显增加(P<0.01或P<0.05)，但胸腺中CD4-CD8-T细胞的比例在两组间无统计学差异。4.2妊娠期母鼠接触SEB对体外培养新生鼠胸腺中TCR Vβ8.2~+T细胞的影响PBS组和SEB组新生鼠胸腺体外与ConA或SEB共培养三天后，SEB组的CD4~+TCRVβ8.2~+T细胞和CD8~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例均较PBS组明显减少(P<0.01或P<0.05)。5.妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响5.1妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠脾脏T淋巴细胞亚群增殖的影响PBS组和SEB组新生鼠脾脏淋巴细胞体外与ConA或SEB共培养三天后，SEB组CD4~+T细胞比例在ConA或SEB刺激第一天分别较PBS组明显增加，但在第2-3天却明显降低(P<0.01或P<0.05)，但两组的CD8~+T细胞比例无统计学差异。而SEB组新生鼠脾脏淋巴细胞中CD4~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例在ConA或SEB刺激的第1天及CD8~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例在连续刺激三天分别较PBS组的明显增加(P<0.01或P<0.05)，但两组CD4~+TCR Vβ8.2~+T细胞比例在ConA或SEB刺激的第2-3天无差异性。5.2妊娠期母鼠接触SEB对新生鼠脾脏淋巴细胞增殖指数的影响PBS组和SEB组新生鼠脾脏淋巴细胞体外与ConA或SEB共培养三天后，3H掺入法检测结果发现SEB组新生鼠脾脏淋巴细胞在ConA或SEB刺激后第1天增殖能力明显强于PBS组，但在第2-3天的增殖能力却又明显低于PBS组(P<0.01或P<0.05)。结论：1.妊娠期母鼠接触SEB可明显影响胎鼠胸腺及脾脏的发育；2.妊娠期母鼠接触SEB可通过中枢和外周两种克隆清除方式导致新生鼠TCRVβ8.2~+T细胞比例减少，但SEB并非仅仅作用于TCR Vβ8.2~+T细胞，可能对其它的T淋巴细胞也产生影响；3.在受到抗原刺激时，妊娠期母鼠接触SEB并不影响新生鼠胸腺中DN细胞向DP细胞的发育过程，但明显减少DP细胞向SP细胞的成熟过程；4. CD4~+T细胞可能是妊娠期接触SEB母鼠的新生鼠脾脏淋巴细胞增殖的主要细胞群体；5.妊娠期母鼠接触SEB已在新生儿期对新生鼠CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及TCRVβ8.2~+T细胞形成印迹效应，可能成为胎源性疾病的起源。