第一部分酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞的表达及功能目的：酸敏感离子通道（acid-sensing ion channels，ASICs）是一种配体门控型离子通道，属于退化蛋白/上皮钠通道超家族（DEG/ENaC）成员。自1980年在神经元细胞膜上首次被发现报道后，受到越来越多的关注。神经系统中，ASICs广泛分布于前脑、中脑、脑干、脑桥、小脑、上丘脑、脊髓等部位，随着研究的深入，人们发现在神经元外也有大量的ASICs表达，包括神经胶质细胞和免疫细胞。不同的ASIC亚单位在多种生理病理过程中发挥着重要作用，包括缺血性脑损伤、疼痛、学习记忆、癫痫、多发性硬化、偏头痛、肠应激综合症等。已有研究表明，ASICs与免疫炎症具有密切的关系，但小胶质细胞上是否有ASICs的表达目前尚无报道。本实验旨在从基因水平和蛋白水平检测ASICs的表达，并研究该通道在小胶质细胞上的特性。方法：采用RT-PCR的方法在mRNA水平检测小胶质细胞ASICs的表达；实时定量PCR定量分析ASIC1、2a、3三种亚型在小胶质细胞表达的比例；western blotting方法在蛋白水平检测小胶质细胞ASICs的表达；细胞免疫荧光标记的方法确定ASICs三种亚型在小胶质细胞上的分布；全细胞膜片钳检测小胶质细胞ASICs电流特性；钙离子成像的方法检测小胶质细胞上ASICs通道的离子通透性。结果：（1）从基因和蛋白水平分别证实ASIC1、2a、3三种亚型在小胶质细胞上均有表达，实时定量PCR结果表明，ASIC1表达量最多，ASIC3次之，ASIC2a最少。其中，ASIC1和ASIC3在胞浆和胞核中均有分布，而ASIC2a主要分布在胞核。（2）LPS刺激的小胶质细胞胞外pH值快速降低可诱发ASIC样电流，该电流具有pH依赖性，pH0.5为6.00±0.04；此外，该电流可被100μM阿米洛利抑制，抑制率为63.15%±6.9%；（3）胞外酸化可引起LPS刺激的小胶质细胞胞内钙升高，该作用可被100μM阿米洛利和10nM PcTx1抑制，抑制率分别达到了61.7%±4.8%和47.3%±6.2%。结论：小胶质细胞上存在ASICs的表达，其中ASIC1拥有最为丰富的转录基因。LPS刺激小胶质细胞，易化胞外快速酸化诱发的内向电流和胞内钙升高。第二部分酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞炎症反应中的作用及机制目的：炎症发生时常常伴有组织的酸化，即病变处pH值低于正常，这种低pH环境被认为是炎症反应的标志，感受这种变化就能在炎症反应中发挥作用。而机体中确有一种酸敏感离子通道，能够感受细胞外pH的下降，即被细胞外H+激活，通过对Na+和Ca2+的通透形成内向电流，导致细胞膜去极化，产生兴奋性效应。目前已经证实ASICs确实在炎性反应中发挥重要作用。至于ASICs在小胶质细胞神经炎症的免疫调节中的作用还不明确。本实验旨在研究ASICs在LPS刺激下对小胶质细胞炎症因子的表达和划痕迁移中的作用。方法：采用western blotting方法观察LPS诱导的小胶质细胞iNOS和COX-2的表达，利用ASICs通道非特异性阻断剂amiloride和ASIC1a特异性阻断剂PcTx1研究ASICs在其中发挥的作用；细胞免疫荧光标记的方法观察划痕诱导的小胶质细胞的迁移，利用ASICs通道非特异性阻断剂amiloride和ASIC1a特异性阻断剂PcTx1研究ASICs在其中发挥的作用。结果：（1）LPS诱导小胶质细胞ASIC1和ASIC2a蛋白表达增加，且ASIC1膜蛋白表达增加。（2）LPS诱导iNOS和COX-2的表达，该作用可被ASICs通道阻断剂阿米洛利及PcTx1抑制。（3）ASICs通道阻断剂阿米洛利及PcTx1通过抑制ERK磷酸化来抑制划痕诱导的小胶质细胞迁移。结论：ASICs参与了LPS诱导的小胶质细胞炎症因子的表达和划痕诱导的小胶质细胞的迁移。